动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）可以累及颈动脉、冠状动脉以及其他动脉，是高血压、中风、心肌梗塞等心血管疾病的共同病理基础，是严重危害人类健康的常见病、多发病之一。炎症在动脉粥样硬化形成中扮演重要的角色，贯穿于动脉粥样硬化起始、病变进展、斑块破裂以及血栓形成的全过程。一些炎症的标志基因就被用来预测心血管疾病发生的风险，如C-反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子、白细胞介素等。近来越来越多的研究表明脂蛋白相关的磷脂酶A2（Lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA₂）具有促进动脉粥样硬化的作用，与心血管疾病事件紧密相关，成为了治疗心血管疾病新的潜在目标靶点。Lp-PLA₂是磷脂酶超家族的一员，又称为血小板活化因子水解酶（PAF-AH），是钙离子非依赖性的磷脂酶，动脉粥样硬化形成过程中由多种炎症细胞（单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞和肥大细胞）产生并分泌。在人类血液循环中80%的Lp-PLA₂与低密度脂蛋白（LDL）片段上的ApoB c末端结合，剩余的部分与HDL、脂蛋白（a）和一些极低LDL结合。LDL被氧化后，Lp-PLA₂就通过短的sn-2酯键作用于磷脂的水溶部分，产生两种炎症介质：溶血卵磷脂（lyso-LPC）和氧化的非酯化脂肪酸（oxNE-FAS），它们具有很强促炎症反应特征。研究表明，在小鼠血液循环中，Lp-PLA₂主要与高密度脂蛋白（HDL）结合，水解血小板活化因子（PAF），抑制动脉粥样硬化形成，并降低心肌梗塞、中风的发生率；而在人体血液循环中，LP-PLA₂却与LDL结合，作用于氧化低密度脂蛋白（OxLDL），并产生两种促炎因子，促进动脉粥样硬化发生和发展。因此，Lp-PLA₂的小鼠疾病模型不能模拟人类动脉粥样硬化的形成过程。目前，还没有统一的动脉粥样硬化动物模型的标准。但是由于猪在解剖上以及心血管系统、消化系统、皮肤结构、营养需要和代谢等多项生理生化指标方面与人类有极大的相似性，动脉循环系统几乎是人的动脉循环系统的复制品。在心血管疾病方面，猪过度紧张或兴奋等刺激会使猪发生动脉硬化、心肌梗塞等心血管疾病。因此猪模型被认为是模拟人类动脉粥样硬化发生发展的最佳选择。本实验根据NCBI上公布的猪Lp-PLA₂mRNA序列设计引物，以小型猪肺脏cDNA为模板进行PCR，将扩增产物连接进入具有EF1α启动子的pIRES2-EGFP真核表达载体中，成功构建Lp-PLA₂真核表达载体。然后，将猪Lp-PLA₂表达载体转染入小型猪胎儿成纤维细胞，经过G418抗性筛选，鉴定，成功得到Lp-PLA₂基因的猪成纤维细胞系。随后经核移植、胚胎移植，最终获得3只Lp-PLA₂转基因猪。经过对其表型的初步分析，3只均为阳性Lp-PLA₂转基因猪。通过获得Lp-PLA₂转基因猪，为研究Lp-PLA₂调节动脉粥样硬化发生和发展的机制打下基础。有利于为开发治疗动脉粥样硬化药物提供新的模型，同时有望在动脉粥样硬化发生机制上取得新突破。