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目的:
考察柴胡醋制后成分及药效差异，为阐释柴胡醋制所致的功效-成分变化奠定基础。
方法:
1.醋柴胡活性部位的化学成分研究:生、醋柴胡使用70％乙醇提取后，经过石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位，将水部位通过AB-8大孔树脂，用水、20％、50％、75％、95％乙醇分别进行洗脱，得到四个部位。采用ESI-Orbitrap-MS分析技术对生醋柴胡中的四个部位分别进行定性分析，靶标差异性成分，针对差异性成分有目的地进行分离得到单体化合物。通过ESI-Orbitrap-MS、1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HSQC等现代色谱光谱技术，鉴定化合物的结构。
2.柴胡皂苷抗乙肝病毒作用研究:选用HepG2.2.15细胞作为体外研究模型，将分离出的单体化合物配制成系列浓度的工作液作用于HepG2.2.15细胞，采用MTT法检测细胞存活率，确定给药浓度。选用对细胞的无毒性浓度给药，设置高、中、低剂量组，检测柴胡皂苷对乙型肝炎病毒表面抗原、e抗原和病毒核酸的影响。
3.柴胡皂苷抗乙肝病毒作用的机制初探:柴胡皂苷b2和柴胡皂苷d作用于HepG2.2.15细胞后，采用RT-qPCR法检测细胞中Ntcp、Bsep、Mrp2、Pgp、HNF-1α、HNF-4α的mRNA表达的影响，进一步采用Western-blot法检测柴胡皂苷b2、d对细胞中Ntcp、HNF-1α、HNF-4α蛋白表达的影响，从病毒入胞、转运蛋白、肝核因子方面探讨抗病毒机制。
结果:
1.运用LTQ-Orbitrap高分辨质谱分析技术研究了柴胡皂苷类化合物的质谱裂解规律，对柴胡各部位进行定性分析，发现柴胡醋制后柴胡皂苷b2及乙酰化成分增多。
2.从75％乙醇部位中分离得到9个单体成分，均为柴胡皂苷类，三个乙酰化柴胡皂苷:6"-O-乙酰柴胡皂苷c(4)、6"-O-乙酰柴胡皂苷f(6)、6"-O-乙酰柴胡皂苷b2(7)，其中化合物4、6为新化合物。柴胡皂苷b3(1)、柴胡皂苷a(2)、柴胡皂苷f(3)、柴胡皂苷c(5)、柴胡皂苷b2(8)、柴胡皂苷b1(9)为已知化合物。
3.将分离到的单体成分作用于HepG2.2.15细胞，使用MTT法发现:无细胞毒浓度柴胡皂苷a为10μM、柴胡皂苷b1为25μM、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、6"-O-乙酰柴胡皂苷b2、6"-O-乙酰柴胡皂苷f均为100μM、柴胡皂苷d为5μM，后续研究最高不高于上述浓度。
4.在相应的高、中、低浓度给药下，柴胡皂苷b2，6"-O-乙酰柴胡皂苷b2、柴胡皂苷f、6"-O-乙酰柴胡皂苷f、柴胡皂苷b3、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d均可有效抑制表面抗原，并且呈浓度依赖性，柴胡皂苷a和b1对表面抗原无明显影响;柴胡皂苷类化合物对乙肝病毒e抗原均无显著抑制作用。柴胡皂苷类化合物均可显著降低病毒核酸的含量，并且呈浓度依赖性。
5.由于分离得到的单体成分含量较少，部分单体成分的量不足以完成完整的机制探讨，所以选取代表性的化合物柴胡皂苷b2（柴胡醋制后含量增加最多）和柴胡皂苷d(柴胡醋制后转化成柴胡皂苷b2)进行后续的实验研究。高剂量的柴胡皂苷b2可下调Ntcp、HNF-4α的mRNA表达、上调Mrp2的mRNA表达，中、高剂量的柴胡皂苷b2上调Bsep的mRNA表达，对PgP和HNF-1α无显著影响。高剂量的柴胡皂苷d能下调Ntcp、HNF-1α的mRNA表达、上调Bsep的mRNA表达，对Mrp2、Pgp、HNF-4α无显著影响。
6.针对Ntcp、HNF-1α、HNF-4α蛋白的Westem-blot结果分析显示:中、高剂量的柴胡皂苷b2显著下调Ntcp和HNF-1α的蛋白表达，高剂量显著下调HNF-4α的蛋白表达;高剂量的柴胡皂苷d显著下调HNF-1α和HNF-4α的蛋白表达，对Ntcp的蛋白表达无显著性影响。
结论:
柴胡醋制后柴胡皂苷b2和乙酰化柴胡皂苷成分增多，醋制可降低毒性较强的柴胡皂苷d的含量;从醋柴胡中分离的柴胡皂苷单体成分有一定的抗乙肝病毒作用，其作用可能通过调控乙肝病毒功能性受体Ntcp、肝特异转运蛋白和肝核因子实现。
考察柴胡醋制后成分及药效差异，为阐释柴胡醋制所致的功效-成分变化奠定基础。
方法:
1.醋柴胡活性部位的化学成分研究:生、醋柴胡使用70％乙醇提取后，经过石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位，将水部位通过AB-8大孔树脂，用水、20％、50％、75％、95％乙醇分别进行洗脱，得到四个部位。采用ESI-Orbitrap-MS分析技术对生醋柴胡中的四个部位分别进行定性分析，靶标差异性成分，针对差异性成分有目的地进行分离得到单体化合物。通过ESI-Orbitrap-MS、1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HSQC等现代色谱光谱技术，鉴定化合物的结构。
2.柴胡皂苷抗乙肝病毒作用研究:选用HepG2.2.15细胞作为体外研究模型，将分离出的单体化合物配制成系列浓度的工作液作用于HepG2.2.15细胞，采用MTT法检测细胞存活率，确定给药浓度。选用对细胞的无毒性浓度给药，设置高、中、低剂量组，检测柴胡皂苷对乙型肝炎病毒表面抗原、e抗原和病毒核酸的影响。
3.柴胡皂苷抗乙肝病毒作用的机制初探:柴胡皂苷b2和柴胡皂苷d作用于HepG2.2.15细胞后，采用RT-qPCR法检测细胞中Ntcp、Bsep、Mrp2、Pgp、HNF-1α、HNF-4α的mRNA表达的影响，进一步采用Western-blot法检测柴胡皂苷b2、d对细胞中Ntcp、HNF-1α、HNF-4α蛋白表达的影响，从病毒入胞、转运蛋白、肝核因子方面探讨抗病毒机制。
结果:
1.运用LTQ-Orbitrap高分辨质谱分析技术研究了柴胡皂苷类化合物的质谱裂解规律，对柴胡各部位进行定性分析，发现柴胡醋制后柴胡皂苷b2及乙酰化成分增多。
2.从75％乙醇部位中分离得到9个单体成分，均为柴胡皂苷类，三个乙酰化柴胡皂苷:6"-O-乙酰柴胡皂苷c(4)、6"-O-乙酰柴胡皂苷f(6)、6"-O-乙酰柴胡皂苷b2(7)，其中化合物4、6为新化合物。柴胡皂苷b3(1)、柴胡皂苷a(2)、柴胡皂苷f(3)、柴胡皂苷c(5)、柴胡皂苷b2(8)、柴胡皂苷b1(9)为已知化合物。
3.将分离到的单体成分作用于HepG2.2.15细胞，使用MTT法发现:无细胞毒浓度柴胡皂苷a为10μM、柴胡皂苷b1为25μM、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、6"-O-乙酰柴胡皂苷b2、6"-O-乙酰柴胡皂苷f均为100μM、柴胡皂苷d为5μM，后续研究最高不高于上述浓度。
4.在相应的高、中、低浓度给药下，柴胡皂苷b2，6"-O-乙酰柴胡皂苷b2、柴胡皂苷f、6"-O-乙酰柴胡皂苷f、柴胡皂苷b3、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d均可有效抑制表面抗原，并且呈浓度依赖性，柴胡皂苷a和b1对表面抗原无明显影响;柴胡皂苷类化合物对乙肝病毒e抗原均无显著抑制作用。柴胡皂苷类化合物均可显著降低病毒核酸的含量，并且呈浓度依赖性。
5.由于分离得到的单体成分含量较少，部分单体成分的量不足以完成完整的机制探讨，所以选取代表性的化合物柴胡皂苷b2（柴胡醋制后含量增加最多）和柴胡皂苷d(柴胡醋制后转化成柴胡皂苷b2)进行后续的实验研究。高剂量的柴胡皂苷b2可下调Ntcp、HNF-4α的mRNA表达、上调Mrp2的mRNA表达，中、高剂量的柴胡皂苷b2上调Bsep的mRNA表达，对PgP和HNF-1α无显著影响。高剂量的柴胡皂苷d能下调Ntcp、HNF-1α的mRNA表达、上调Bsep的mRNA表达，对Mrp2、Pgp、HNF-4α无显著影响。
6.针对Ntcp、HNF-1α、HNF-4α蛋白的Westem-blot结果分析显示:中、高剂量的柴胡皂苷b2显著下调Ntcp和HNF-1α的蛋白表达，高剂量显著下调HNF-4α的蛋白表达;高剂量的柴胡皂苷d显著下调HNF-1α和HNF-4α的蛋白表达，对Ntcp的蛋白表达无显著性影响。
结论:
柴胡醋制后柴胡皂苷b2和乙酰化柴胡皂苷成分增多，醋制可降低毒性较强的柴胡皂苷d的含量;从醋柴胡中分离的柴胡皂苷单体成分有一定的抗乙肝病毒作用，其作用可能通过调控乙肝病毒功能性受体Ntcp、肝特异转运蛋白和肝核因子实现。