百合花姿雅致,花色鲜艳,芳香浓郁,是盆栽、切花和点缀庭院的名贵花卉。全世界切花百合年销量数以亿计,我国近几年的需求量也急剧上升。然而无论是作盆栽、切花还是园林中应用,百合的花期短,给人们的观赏都带来了美中不足的感觉,如何延长百合花朵的寿命已成为近20年来科学研究的主要课题之一。由于常规杂交育种的局限性和化学保鲜剂使用的毒副作用,目前许多专家都把目光投向转基因植物育种应用上。本研究是以东方百合“索邦”(Sorbonne)的无菌苗为材料,将从牡丹中克隆到的PeACC(ACC氧化酶)基因片段采用RNA干扰(dsRNA-mediated gene silencing)技术构建成的载体,利用根癌农杆菌介导法导入百合外植体,通过PCR检测后获得阳性表达的植株。研究取得的主要结果是:1.获得了东方百合“索邦”鳞片离体再生体系,其中鳞片分化最佳培养基为:MS+6-BA1.0mg·L–1+NAA0.1mg·L–12.建立了比较稳定高效离体基因转化的直接分化受体系统(1)诱导小叶柄分化率最高的激素组合为MS+6-BA2.0 mg·L–1+NAA0.3mg·L–1;诱导鳞片叶分化率最高的激素组合为MS+6-BA1.0 mg·L–1+2,4-D0.3 mg·L–1 ;(2)转化植株生根培养基激素组合为:MS+NAA0.5 mg·L–1;(3)筛选百合转基因植株的卡那霉素最佳浓度:小叶柄作转基因受体材料时,卡那霉素以80mg·L–1为宜;鳞片叶作为转基因的受体材料时,卡那霉素以120mg·L–1为宜;(4)筛选了羧苄青霉素抑菌的最佳浓度:东方百合“索邦”组培苗的小叶柄和鳞片叶作为农杆菌介导的基因转化受体材料时,抑菌所用羧苄青霉素的浓度应以300mg·L–1为宜。3.影响百合农杆菌介导遗传转化因素的研究,结果表明:(1)通过不同菌液浓度对转化的影响试验得出,菌液浓度在OD600为0.8左右时浸染效果最好;(2)乙酰丁香酮能明显提高百合转化植株的再生频率,转化前重悬菌体时加入100 umol·L–1 AS活化2～3小时,可以提高农杆菌转化百合筛选的抗性植株再生率;(3)经过预培养3天的外植体转化并筛选后的再生率最高。对百合而言,预培养方法可以减轻伤害胁迫,调整细胞状态从而有利于农杆菌的感染。4.本研究共得到卡那霉素抗性植株40株,对所有卡那霉素抗性植株进行PCR检测,有6株扩增出目标条带,初步证明外源基因已经整合到这6株植物基因组中。