乳酸菌是广泛存在于自然环境中,种类繁多,作为益生菌广泛应用于食品、医药以及畜牧业等领域。乳酸菌是近些年来,对预防和治疗胃肠道疾病、调节微生物菌群在胃肠道内平衡,提高机体免疫力起到了重要作用。然而乳酸菌在发挥益生作用时,通过与宿主发生粘附而定植,从而抑制致病菌的粘附。粘附是乳酸菌发挥益生作用的第一步,而粘附的主要物质是乳酸菌的表面蛋白,本实验主要对乳酸菌的表面蛋白进行提取与鉴定,以及延伸因子EF-Tu的免疫生物学特性进行研究。研究内容如下：(1)对不同菌株的乳酸菌的疏水性和自凝聚能力进行测定,戊糖片球菌F 28-8的疏水性、自凝聚能力最强,植物乳杆菌HP 12的疏水性、自凝聚能力最弱。同一方法提取不同疏水性的乳酸菌表面蛋白,提取表面蛋白的效率不同。结果显示,戊糖片球菌F 28-8提取其表面蛋白效率却是最低的。相反,植物乳杆菌HP 12提取其表面蛋白的效率最高。(2)采用3种方法提取乳酸菌表面蛋白,用1 mg/mL溶菌酶结合1 mol/L LiCl方法提取乳酸菌的表面蛋白效果最好。用1 mg/mL溶菌酶结合1 mol/L LiCl提取表面蛋白的量是另外两种方法的3倍以上。电镜结果显示,戊糖片球菌H 13用1 mg/mL溶菌酶结合1 mol/L LiCl处理后,表面蛋白明显溶出,表明1 mg/mL溶菌酶结合1 mol/L LiCl提取表面蛋白效率最高。(3)戊糖片球菌H13表面蛋白的鉴定结果显示,表面蛋白中大多数的蛋白为中间代谢产物和运输蛋白,在同一相对分子质量条带有多种蛋白存在。但延伸因子EF-Tu所在条带蛋白种类最少,相同位置的植物乳杆菌条带鉴定只有延伸因子EF-Tu,且具有高度免疫原性,由此可以作为乳酸菌菌株分离的蛋白靶标。(4)通过延伸因子EF-Tu抗血清检测乳酸菌的菌体和其他的非乳酸菌的菌体和裂解物进行交叉反应,大肠杆菌、沙门氏菌以及弧菌的菌体与裂解物对延伸因子EF-Tu抗血清都不呈现阳性反应,而戊糖片球裂解物以及植物乳杆菌、棒状乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌的菌体和裂解物呈现阳性反应,结果表明延伸因子EF-Tu是区分乳酸菌与其他菌株的目的蛋白。