甜菜抗性相关Mlo基因的克隆及表达分析

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Mlo基因(Mildew resistance locus o)最初在大麦中发现,它与R基因的不同之处在于突变的隐性等位基因Mlo赋予了几乎所有白粉病菌分离株的广谱抗性。此外,Mlo基因还参与了许多植物的生命活动过程,通过在不同组织中的差异性表达影响着植物的生长发育。由球腔菌属(Mycosphaerella)尾孢菌(Cercospora beticola Sacc.)引起的甜菜褐斑病是一种严重威胁甜菜产量的真菌病害,其普遍发生于我国东北甜菜主要种植区域,几乎每年都有发生,目前,对褐斑病的抗性研究并不充分,且其防治手段仍主要为化学防治,存在着较为严重的生态问题。目前对Mlo基因与植物抗性相关的研究已经应用于大量作物之中,推测其也可能为甜菜抗性相关基因。由于Mlo基因与甜菜相关的研究尚无报道,在甜菜中对Mlo基因展开研究或能够为培育高品质的甜菜品种提供新的理论参考和抗性分子育种方向。主要研究结果如下:1、本研究鉴定获得10条甜菜BvMlo基因家族成员序列,其编码区长度在1257 bp~1719 bp之间,分散在甜菜的1、3、4、5、6号染色体上,形成2个自然基因簇。BvMlo基因家族编码418~572个氨基酸,大多为碱性氨基酸。BvMlo蛋白大多为不稳定蛋白且主要为两性蛋白,主要表现为疏水性。其氨基酸序列高度一致,具有较强的保守性,含有7~10个保守基序以及4~7个跨膜结构域。蛋白二级结构中α-螺旋结构占比最大,含有大量磷酸化位点。多个激素应答与非生物胁迫元件在BvMlo基因家族启动子区域被发现,但只有BvMlo10含有信号肽。系统发育结果表明BvMlo基因家族大多聚集在第VI类群,与已报到的白粉病相关基因以及组织表达相关基因同类群,推测其也可能参与植物与真菌病害和非生物胁迫互作反应。2、本研究克隆得到BvMlo2完整CDS序列1374 bp以及BvMlo7基因870 bp,序列比对结果正确且具有完整的开放阅读框,可用作后续表达试验。3、BvMlo2与BvMlo7基因的表达量在尾孢菌诱导后明显上调,其中BvMlo2变化时期更早且表达量更高。基因的上调表达是尾孢菌成功侵染甜菜的关键,推测BvMlo2和BvMlo7都可能与褐斑病抗性起到负调控作用,是褐斑病感病相关基因,且BvMlo2可能对褐斑病的响应的敏感性密切相关。4、在水杨酸和茉莉酸甲酯处理下,BvMlo2基因下调,表达量受到抑制且几乎不在甜菜中表达,BvMlo7则相反。在Na Cl和甘露醇处理下,BvMlo2基因表达量显著上调,BvMlo7上调更为迟缓。说明BvMlo2和BvMlo7基因可能不同程度的参与各类胁迫响应,推测BvMlo2和BvMlo7基因的表达与调控可能使植物能够抵御外界胁迫对其造成的影响,但它们的功能性仍需要进一步验证。
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