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阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease, AD)是老年痴呆症的首要病因,是一多发在老年,以近期记忆障碍为主要临床症状,以老年斑(SP)、神经元纤维缠结(NFT)和神经元丢失为主要病理改变的进行性神经变性疾病,严重影响患者的认知功能、记忆功能、语言功能、视空间功能、社会生活能力、个人生活能力和情感人格等,其病因和发病机制尚不清楚。目前受到广泛认同的病因和机制主要有以下几种学说：神经递质缺陷；钙稳态失调；自由基损伤；基因突变；能量代谢障碍；神经细胞凋亡；兴奋性递质毒性；淀粉样蛋白(Ap)沉积等。玉郎伞(Millettia pulchra Kurz var laxior(Dunn) Z.Wei, YLS)是广西壮族习用药材,有补气、补血、提高免疫力、抗衰老、抗应激等作用,可强身健体、消除疲劳,主要用于老年健忘、小儿智力低下等疾病的治疗,亦用于体弱多病及病后、产后虚弱等的滋补。本研究从玉郎伞提取多糖成分,并对玉郎伞多糖[Millettia pulchra Kurz var laxior(Dunn) Z. Wei polysaccharides, YLSP]抗痴呆作用及机制进行了研究。1、正交法优化YLSP提取工艺及含量测定方法的研究葡萄糖的检测浓度在15.12-65.52μg·mL-1范围内与吸光度呈现良好的线性关系,结果精密度高,平均加样回收率为98.25%,RSD=1.72%；通过提取条件的正交试验发现,浸泡3小时、加10倍量水、提取3次,每次3小时条件下YLSP得率最高。因此,通过优化提取条件,能够提高YLSP的得率和纯度。苯酚-硫酸法准确度高、稳定性好,可作为YLSP的含量测定方法。2、YLSP对AP25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用采用AP25-35诱导PC12细胞损伤作为AD细胞模型,通过MTT比色法测定分析细胞存活率；倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态改变,测定细胞突起率、突起平均长度；分光光度法检测PC12细胞细胞培养液和(或)细胞内的SOD、GSH-Px和NOS活性,GSH、MDA、NO和LDH的含量；流式细胞仪测定PC12细胞内ROS、钙离子的含量及线粒体膜电位(MMP)。结果显示：Aβ25-35对PC12细胞具有明显的损伤作用,增加细胞死亡率,减少细胞突起率,缩短细胞突起长度,镜下表现出明显的凋亡损伤形态,细胞培养液和(或)细胞内的NOS活性及NO、MDA、ROS、 LDH和钙离子含量明显升高,而SOD、GSH-Px活性及GSH的含量明显降低,MMP也明显降低。YLSP能在一定程度抑制Aβ25-35对PC12细胞的损伤作用：降低细胞死亡率,增加细胞突起率,延长细胞突起长度,镜下凋亡损伤形态显著改变,细胞膜上微绒毛增多,空泡减少,明显降低PC12细胞细胞培养液和(或)细胞内的NOS活性及NO-、MDA、ROS、LDH和钙离子含量,明显提高PC12细胞细胞培养液中及细胞内SOD、GSH-Px活性及GSH的含量,明显提高MMP水平。提示YLSP可能是通过减少脂质过氧化产物的形成、增加抗氧化酶的抗氧化活性,增强细胞总的抗氧化活力而发挥抗痴呆作用。3、YLSP对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的保护作用采用流式细胞仪、DAPI染色方法观察测定PC12细胞凋亡率,Real-time PCR测定PC12细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2、Bax及Caspase-3mRNA表达。结果显示：Aβ25-35能明显增加PC12细胞的凋亡,促凋亡基因p53、Bax、 Caspase-3的mRNA表达含量明显升高,抑凋亡基因Bcl-2基因的mRNA表达含量明显降低。YLSP能显著减少Aβ25-35引起的PC12细胞凋亡,降低细胞凋亡率,降低促凋亡基因p53、Bax、Caspase-3的mRNA表达含量,增加抑凋亡基因Bcl-2mRNA表达含量。提示YLSP可以拮抗Aβ25-35引起的PC12细胞凋亡,逆转上述基因的表达,从而起到抗凋亡的作用。4、YLS1’对SAMP8小鼠额叶、海马神经元Caspase-3表达及活性、Tau蛋白磷酸化的影响采用快速老化小白鼠(senescence accelerated mouse prone8, SAMP8)作为AD动物模型,通过免疫组化的方法观察YLSP对SAMP8小鼠额叶、海马的病理变化,神经元细胞Caspase-3的表达及tau蛋白磷酸化水平的影响。结果显示：SAMP8小鼠额叶、海马神经细胞凋亡明显,Caspase-3阳性细胞数、Caspase-3活性和Tau (pSer202)阳性细胞数均明显高于SAMR1对照小鼠。YLSP能显著减少SAMP8小鼠额叶、海马神经细胞Caspase-3和Tau (pSer202)阳性细胞数,降低Caspase-3活性,提示YLSP能通过抑制凋亡,拮抗Tau (Ser202)的异常磷酸化而发挥抗痴呆的作用。综上所述,YLSP可能是通过清除自由基、对抗氧化应激反应,减少Ca2+内流及LDH释放、提高线粒体膜电位水平,抑制p53、Bax、Caspase-3基因mRNA表达,促进Bcl-2基因的mRNA表达,拮抗Tau (Ser202)的异常磷酸化等机制而达到抗痴呆作用。本文研究认为YLSP可能是治疗神经褪行性疾病如AD的有前景的候选化合物。