千层塔内生菌根菌和伴生蕨的分子鉴定及其生物学效应

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千层塔(Huperzia serrata(Thunb.)Trev.)即蛇足石杉,是一种传统中药材,因其次生代谢产物石杉碱甲能够治疗老年痴呆症、重症肌无力、记忆力衰退等而备受关注。千层塔生长缓慢、生长环境苛刻,资源严重匮乏。大量的市场需求,使千层塔遭受地毯式采摘,野生资源面临灭绝。实现千层塔的快速繁殖是迫在眉睫的事情。在探究千层塔的快速繁殖过程中发现千层塔的生长发育与内生菌根菌和伴生蕨关系紧密,因此本文主要对千层塔内生菌根菌和伴生蕨进行了探究。研究结果如下:1.千层塔与内生菌根存在密切联系,在根尖观察到内生菌根典型的泡囊-丛枝结构。对千层塔根尖内生菌根的侵染程度进行统计,结果显示内生菌根菌侵染率均达到90%以上,平均菌丝长度大于650μm。统计不同形态千层塔根尖内生菌根的侵染程度,发现二分叉株中最高,侵染率为93.15%,侵染强度为7.81条,平均菌丝长度为652μm。2.对湖北恩施千层塔和安徽六安千层塔根尖分离的内生菌根真菌进行形态和分子生物学鉴定,结果显示湖北恩施千层塔内生菌根菌属于腐霉属,安徽六安千层塔内生菌根菌属于被孢霉属。3.湖北恩施千层塔和内生菌根菌作为研究材料,发现菌丝发酵液、灭活菌丝和鲜活菌丝均能够有效促进千层塔的生长和石杉碱甲的生物合成,并提高抗逆性。其中以低浓度(0.2g/株)灭活菌丝培养效果最佳,石杉碱甲含量为0.058%,是对照组的1.35倍;存活率为70%,是对照组的1.1倍:叶绿素含量为1.4 mg/g,是对照组的1.59倍;根活力为0.735 mg/(g.h),是对照组的1.5倍。4.对千层塔伴生蕨进行了DNA条形码技术结合形态学鉴定,结果显示此伴生蕨即金星蕨科金星蕨属狭叶金星蕨。5.建立了狭叶金星蕨的再生体系,结果表明狭叶金星蕨原叶体生长的最佳培养基是MS+1.0 mg/L NAA;诱导孢子体的最佳培养基是不含植物激素的MS培养基,诱导时间为22 d,诱导率为15%;孢子体生根的最佳培养基是MS+1.0 mg/LIAA;孢子体移栽最合适的基质是水苔,移栽成活率达到100%。
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