大鼠心脏移植基因治疗的实验研究

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背景:同种移植排斥反应仍然是阻碍移植成功的最大障碍,组织相容抗原的多态性和供体器官的短缺表明更好地匹配不是解决免疫障碍的方法。免疫抑制剂抑制所有的T细胞或T细胞亚群,引起免疫系统的非特异性抑制。将免疫抑制信号固定在抗原识别和递呈区域,在抗原特异淋巴细胞的启动和活化水平调节免疫系统,可以避免系统性免疫抑制。移植物内表达具有免疫调节能力的基因可延长移植物生存,而有些关于外源性哺乳类动物IL-10对免疫活性影响的报道是相冲突的。因此,设计了本研究课题。目的 第一部分 检验用注射pSV-SPORT1-IL-10质粒的方法转染基因的可行性及其对移植物的影响。第二部分 探讨IL-10对CD4+T细胞在体外活化条件下向Th1/Th2极化的影响。第三部分 探讨质粒DNA直接移植心脏注射,目的基因在移植心脏内的转染和表达。方法第一部分质粒DNA于移植时注射到移植心脏,Wister鼠为供体,SD大鼠为受体,分5组:A组:对照组,B组:pSV-SPORT1-IL-10治疗组,C:组pSV-SPORT1-IL-10加CsA(10mg/kg IP),D组:CsA治疗组,E组:IL-10治疗组。通过触摸心脏跳动,决定移植心脏的存活;检测所有移植心脏受体大鼠血清IL-10;移植心脏行组织化学检查分析。第二部分 用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常大鼠抗凝外周血单核细胞(PBMC)和血浆,将PBMC置于含或不含自身血浆环境中,并在植物血凝素(PHA,20mg/L)的刺激下进行培养。分组:A组:对照组;B组:PHA;C组:PHA+BP+PBS;D组:PHA+BP+IL-10。培养72小时后收获细胞,分别用双色免疫荧光标记,以流式细胞术对CD4+T细胞表达表面分子CCR3、CCR5进行分析。第三部分 pSV-SPORT1-IL-10质粒DNA于移植术前直接注射到移植心脏左心室壁。然后行心脏移植。术后七天抽取受体
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