论文部分内容阅读
鸡传染性支气管炎活疫苗在鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV)的防制过程中起着重要的作用。在我国,除引入的马萨诸塞(Massachusetts)血清型疫苗H120,H52外,还有许多由地方分离株通过鸡胚致弱制备的商品化活疫苗被用于IBV的防制,而且大多数疫苗的分子背景不清楚。为了调查我国IBV疫苗株的来源和进化及其与IBV分离株之间的系统发育关系,我们从八个省、市选择了九株具有代表性的鸡传染性支气管炎活疫苗(28/86,D41,JAAS,H94,IBN,W93,Jilin,J9,HK)作为研究对象,对其病毒基因组3′端的结构蛋白(Spike protein,Membrane protein,Nucleoprotein,Envelope protein)基因和非结构蛋白(3a,3b,5a,5b)基因进行序列测定。通过序列比较,分析疫苗株与参考株相应基因之间的序列同源性;根据结构蛋白基因和非结构蛋白基因的核苷酸序列构建系统发育树,分析疫苗株与参考株之间的系统发育关系。 D41,IBN,W93株从S基因5′端到N基因3′端的核苷酸序列由6842个核苷酸组成;HK株的相应区由6843个核苷酸组成;28/86,H94株的相应区由6849个核苷酸组成;J9株的相应区由6858个核苷酸组成;JAAS,Jilin株的相应区由6864个核苜酸组成。部分基因组序列分析表明这些疫苗株具有典型的禽冠状病毒S-3-M-5-N基因顺序。疫苗株与参考株基因之间的序列同源性及系统发育关系表明九株疫苗株可分为三个基因群:28/86,D41,IBN,W93,H94一群,和H120,H52的系统发育关系近;JAAS,J9一群,和N1/62,Vic S的系统发育关系近;Jilin,HK一群,和Ark DPI的系统发育关系近;其中H94,JAAS,J9,Jilin,HK的基因组序列存在自然重组现象,是自然重组病毒。疫苗株与我国现地IBV分离株基因之间的低核苷酸序列同源性和系统发育关系表明:我国现地IBV分离株与疫苗株之间的基因型不同,这可能是我国免疫鸡群中IB频繁发生的原因之一。 根据IBV疫苗株S1基因的系统发育关系,选择5株最具有代表性的疫苗(JAAS,IBN,Jilin,28/86,J9)进行免疫保护试验。60只SPF白莱航鸡随机分成6组(10只/组),饲养在负压隔离器中。在1日龄时分别用28/86,IBN,Jilin,JAAS,J9经滴鼻途径对1-5组鸡进行免疫接种,第6组鸡用作阴性对照。从免疫后8天到20天,用间接ELISA能从所有免疫鸡的血清样品中检测到抗体。从免疫后4天到16天,用RT-PCR能从所有免疫鸡的口咽拭子中检测到疫苗毒;但从免疫后20天起,所有免疫鸡的口咽拭子均检测不出疫苗毒,说明免疫鸡群不再分泌病毒。在26日龄时,用异种肾致病性分离株tl/CH/LDT3/03对所有试验鸡进行攻毒。攻毒后3天,部分免疫鸡群开始出现IB的临床症状,发病率为20%～100%、死亡率为0～30%;非免疫鸡群的发病率为100%,死亡率为70%。死亡的免疫鸡和非免疫鸡的病理变化主要表现为:肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管有白色的尿酸盐沉积,外观呈现典型的“花斑肾”。病理变化表明免疫鸡的死亡是由肾致病性分离株tl/CH/LDT3/03攻毒引起的。免疫保护试验结果表明:我国目前使用的主要活疫苗对感染异种IBV分离株而发病的免疫鸡群不能提供完全的保护作用。