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第一部分Galectin-7与急性排斥反应及T细胞应答相关性的研究目的：研究galectin-7在小鼠心脏移植物中的表达与定位，以及该蛋白在心脏移植受鼠腹部引流淋巴结中的表达情况，以探讨galectin-7与急性排斥反应及T细胞应答的相关性。方法：建立小鼠腹部心脏移植模型，小鼠异基因(BALB/c→C57BL/6)和同基因(BALB/c→BALB/c)移植心脏分为急排组和对照组。急排组和对照组移植心脏分别于术后3、5、7天获取。应用Western blot法检测小鼠心脏移植物galectin-7蛋白的表达情况。Galectin-7在心脏移植物中的定位通过免疫组织化学染色法检测。无菌分离心脏移植受鼠腹部引流淋巴结，研磨淋巴结，收集研磨后的液体，并将其制备成单细胞悬液，应用流式细胞术检测CD4+T细胞和CD8+T细胞中galectin-7蛋白的表达。结果：我们通过Western blot法发现移植术后3、5、7天急排组移植心脏galectin-7的表达量逐渐增高，且相同时间点急排组移植心脏galectin-7蛋白表达明显高于对照组(0·85±0·03vs.0·69±0·05，1·15±0·11vs.0·81±0·02，和2·02±0·12vs.0·81±0·05；P <0·05)。免疫组织化学染色显示galectin-7主要定位于急排组移植心脏的浸润淋巴细胞及血管内皮细胞，且该蛋白主要表达于细胞核和细胞浆中。此外，急排组受鼠腹部引流淋巴结CD4+galectin-7+T细胞和CD8+galectin-7+T细胞占淋巴细胞的比例明显高于对照组(28·0±1·0%vs.1·2±0·2%；12·4±0·8%vs.0·4±0·1%，P <0·01)。结论：Galectin-7与急性排斥反应和T细胞应答有相关性，并可能发挥促进急性排斥反应的作用。这项发现提示galectin-7可能为急性排斥反应提供新的检测指标和治疗靶点。第二部分Galectin-7蛋白对T淋巴细胞增殖和Thl/Th2平衡的影响目的：在功能性抗CD3/CD28抗体不存在或存在的情况下，研究galectin-7蛋白对T淋巴细胞增殖和Thl/Th2平衡的影响，以探讨galectin-7蛋白在T细胞应答过程中的作用。方法：分离BALB/c小鼠淋巴结并通过碾磨滤过将其制备成单细胞悬液，CFSE标记目的细胞。为研究galectin-7蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用，依据加入galectin-7蛋白剂量的不同分为：空白对照组，实验组（不同浓度galectin-7蛋白）。另外，为了解在功能性抗CD3/CD28抗体存在的情况下galectin-7蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用，依据加入galectin-7蛋白剂量的不同分为：双抗对照组（抗CD3/CD28抗体），G7+双抗组（不同浓度galectin-7蛋白+抗CD3/CD28抗体）。在48孔板中培养T淋巴细胞，每孔的T淋巴细胞个数为5×105个，分别加入功能性抗小鼠CD3/CD28抗体、重组小鼠galectin-7蛋白。37℃、5％CO2条件下避光培养5天。应用流式细胞术检测和分析T淋巴细胞亚群的增殖。运用ELISA法检测上清IFN-γ、IL-4的浓度。运用荧光定量PCR法检测IFN-γ、IL-4mRNA的表达量。结果：Galectin-7蛋白单独作用不具有诱导T细胞增殖的作用。然而，galectin-7蛋白与功能性抗CD3和抗CD28抗体联合作用诱导T淋巴细胞增殖的作用，与单独使用抗CD3/CD28抗体的双抗对照组相比显著增强（P<0.01)。随着galectin-7浓度增加，T淋巴细胞增殖加强，呈剂量依赖性（P<0.05)。在此基础上，我们进一步研究galectin-7对T淋巴细胞分化的影响。Galectin-7蛋白在抗CD3/CD28抗体存在条件下与T淋巴细胞共培养5天后的Th1细胞因子（IFN-γ）和Th2细胞因子（IL-4）表达和分泌，与单独使用抗CD3/CD28抗体的双抗对照组相比，galectin-7显著增强T淋巴细胞表达和分泌INF-γ（P<0.05)，对IL-4的产生无明显影响（P>0.05)。IFN-γ是Th1细胞占优势的重要标志，该结果提示，在抗CD3/CD28抗体存在条件下， galectin-7诱导Th1/Th2细胞的平衡向Th1细胞优势应答偏移。结论：这些结果提示galectin-7具有新的功能：促进活化的T淋巴细胞增殖和向Th1细胞应答偏移。Galectin-7蛋白具有抗感染、抑制肿瘤细胞生长、诱导自身免疫性疾病和排斥反应的作用。通过抑制galectin-7蛋白的表达有可能诱导移植免疫耐受和治疗自身免疫性疾病。所以，galectin-7在感染、肿瘤、自身免疫性疾病及器官移植后排斥反应等免疫相关性疾病的认知和治疗方面可能具有重要意义。第三部分Galectin-7蛋白对TGFβ/Smad3通路的抑制作用目的：在功能性抗CD3/CD28抗体存在的情况下，研究galectin-7蛋白对pSmad3在T淋巴细胞中分布的影响，探讨galectin-7蛋白促进活化的T淋巴细胞增殖并诱导其向Th1细胞优势应答偏移的作用是否与抑制TGFβ/Smad3通路有关。方法：分离BALB/c小鼠淋巴结并通过碾磨滤过将其制备成单细胞悬液，在抗CD3/CD28抗体存在的情况，根据是否加入小鼠galectin-7蛋白分为两组：双抗对照组（抗CD3/CD28抗体），G7+双抗组（galectin-7蛋白+抗CD3/CD28抗体）。功能性抗小鼠CD3/CD28抗体与T淋巴细胞共同孵育24h后，G7+双抗组加入重组小鼠galectin-7蛋白孵育60min。分别应用Western blot和免疫荧光染色的方法分析两组T淋巴细胞中galectin-7及pSmad3的表达和定位的情况。结果：免疫荧光染色结果显示，双抗对照组T淋巴细胞galectin-7和pSmad3蛋白均匀分布于胞核和胞浆，而G7+双抗组T淋巴细胞galectin-7和pSmad3蛋白主要分布于胞浆，聚集于胞核周围。Western blot结果显示，galectin-7和pSmad3蛋白在G7+双抗组T淋巴细胞胞核的表达量显著低于双抗对照组（P<0.05)。与此同时，galectin-7和pSmad3蛋白在G7+双抗组T淋巴细胞胞浆的表达量显著高于双抗对照组（P<0.05)。结论：本研究表明，galectin-7可以与抗CD3/CD28抗体活化的T细胞中的pSmad3蛋白相互作用，并诱导pSmad3蛋白向胞浆转位。这项发现意味着galectin-7有阻断活化的T淋巴细胞TGFβ/Smad信号通路的作用。本研究首次阐明galectin-7在T淋巴细胞应答过程中可能的作用机制：通过诱导活化的T淋巴细胞pSmad3蛋白胞浆转位促进活化的T淋巴细胞增殖并向Th1细胞偏移。该研究可能为器官移植排斥反应、自身免疫性疾病、感染及肿瘤等治疗提供新的策略和思路。