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毒品戒断后的高复吸率是当今社会严重的公共卫生问题。而戒断者再次接触吸毒相关的环境线索引起的潜伏心理渴求现象是导致复吸的重要因素。TMEFF1(Tomoregulin-1)是一种新型跨膜蛋白,有研究证明TMEFF1是成瘾相关蛋白(addicsin)的调节因子,参与吗啡成瘾过程,而其在吗啡复吸尤其是心理渴求过程中的作用鲜有报道。因此本研究重点关注TMEFF1蛋白在吗啡潜伏心理渴求中的作用。蛋白功能的调控涉及多种机制,其中微小RNA(microRNA,miRNA)发挥着重要作用。miRNA是指长约22个核苷酸的单链非编码RNA,主要在转录后水平调控基因表达。因此本研究拟通过高通量测序、生物信息学分析、转录组学等技术,阐明miR-592-3p靶向TMEFF1调控机制在吗啡潜伏心理渴求过程中的作用。目的:本研究以TMEFF1为目标观察其对吗啡潜伏心理渴求的影响,同时寻找其上游miR-592-3p的调控机制,为预防吗啡复吸提供新思路。方法:小鼠皮下注射(s.c.)生理盐水或吗啡(1 mg/kg或5 mg/kg)交替训练6天,在吗啡戒断后第1天(T1/WD1)、第14天(T2/WD14)进行小鼠CPP测试,建立吗啡潜伏心理渴求模型。应用Western Blot检测模型小鼠伏隔核(NAc)核部(NAcC)和壳部(NAcSh)TMEFF1表达;然后,构建腺病毒载体,抑制TMEFF1的表达,通过行为学条件位置偏爱(CPP)测试观察伏隔核TMEFF1表达变化对小鼠潜伏心理渴求的影响。通过伏隔核miRNA高通量测序,筛选表达下调的miRNA,并结合Targetscan等在线数据库预测能够调控TMEFF1的miRNA,经qRT-PCR验证后确定目标miRNA—miR-592-3p。构建腺病毒载体,过表达miR-592-3p,观察其对小鼠吗啡潜伏心理渴求的影响。同时采用双荧光素酶实验明确miR-592-3p和TMEFF1 mRNA 3′UTR二者之间是否存在结合位点。结果:1.CPP测试结果显示T2期CPP得分较T1期明显升高(P<0.01),说明小鼠潜伏心理渴求模型建立成功。2.模型小鼠T2期NAcC TMEFF1表达量较T1期明显升高(P<0.05),而NAcSh无变化;抑制NAcC TMEFF1表达后,模型小鼠T2期CPP评分较T1期明显降低(P<0.001),提示小鼠对吗啡的渴求程度降低,但抑制NAc ShTMEFF1,其渴求程度无变化。3.通过miRNA测序结合Target Scan等数据库搜索到8个在模型小鼠T2期表达量下降的miRNA,其中miR-592-3p下降最明显(P<0.001),经q RT-PCR验证后,选其作为目标miRNA进行后续研究。过表达NAcC miR-592-3p后,发现模型小鼠T2期CCP评分较T1期明显减低(P<0.001),提示过表达miR-592-3p可抑制小鼠对吗啡的心理渴求;而过表达NAcSh miR-592-3p无变化。4.双荧光素酶实验结果显示,miR-592-3p模拟物荧光素酶活性较对照组明显降低(P<0.01),提示miR-592-3p与TMEFF1 mRNA 3’UTR能够特异性结合。结论:1.TMEFF1通过伏隔核核部调控吗啡潜伏心理渴求。2.miR-592-3p可负向调控TMEFF1的表达,在吗啡潜伏心理渴求中发挥重要作用。