论文部分内容阅读
目的:探讨正常膀胱组织和膀胱癌组织与上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因的表达情况,为后续研究膀胱癌复发与转移提供证据。选取表达差异性大的基因SOX10作为研究方向,研究其对膀胱肿瘤EMT的影响的体外实验。方法:1、收取膀胱癌组织和正常膀胱组织标本27例并液氮保存,冰冻切片后HE染色法区分膀胱癌组织与正常膀胱组织,用德国QIAGEN公司Cancer Pathway Finder PCR Array板选择与EMT相关信号通路中的10个基因CDH2、DSP、FOXC2、GSC、KRT14、OCLN、SNAI1、SNAI2、SNAI3、SOX10在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达情况。2.选择表达差异最大的基因SOX10作为目标基因,对目标基因进行多样本验证,并采用构建慢病毒载体过表达SOX10在膀胱癌细胞系J82中表达,用real-time RT-PCR和western blot检测转染成功率;q RT-PCR及western blot技术检测E-cadherin的m RNA及蛋白表达变化;MTT检测增殖率变化情况;transwell评估细胞侵袭能力的改变;划痕实验测验细胞迁移能力改变。结果:1、对比正常膀胱组织,膀胱癌组织有4个基因表达上升,6个基因表达下降,上升基因为DSP、GSC、KRT14、OCLN,下降基因分别为CDH2、FOXC2、SNAI1、SNAI2、SNAI3、SOX10,SOX10在膀胱癌中表达差异最大。因此选定SOX10作为兴趣基因,并用收集的样本采用荧光定量RT-PCR重复实验验证,验证表明:SOX10在膀胱癌中表达量显著小于正常膀胱组织(P<0.05)。2、实验组转染慢病毒过表达SOX10载体,荧光显示转染效率为85%;q RT-PCR及western blot检测转染效率结果显示:实验组SOX10的m RNA和蛋白表达显著性上调(P<0.05);q RT-PCR及western blot检测EMT标记物的结果显示,慢病毒转染后,E-cadherin的m RNA及蛋白表达显著上调(Ρ<0.05);transwell表明实验组细胞的侵袭能力显著下调(P<0.05);划痕试验表明我们发现和对照组相比,过表达SOX10的实验组可膀胱癌细胞的迁移能力得到显著的抑制;通过MTT法,连续监测7天实验组与对照组的细胞数变化情况,实验组细胞数目增长量不及对照组,实验组490nm的OD值显著低于对照组(P<0.05)。结论:1、SOX10在膀胱癌中表达低于正常膀胱组织;2、SOX10可以抑制膀胱癌细胞的迁移、侵袭以及增殖能力,并抑制了膀胱癌细胞EMT。