特异性环氧化酶-2抑制剂塞莱西布体外诱导肝癌细胞凋亡及其化疗协同作用

来源 :第四军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rachieyu
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目的: 本研究旨在研究特异性环氧化酶-2的抑制剂——塞莱西布在体外对人类肝癌、胃癌细胞的生长抑制、促凋亡作用,以及与化疗药物协同杀伤肝癌细胞的作用。通过观察其在不同浓度时抑制肝癌细胞生长及促凋亡作用,以及协同不同化疗药物的杀伤作用,初步探讨了该现象背后的可能机制,为临床应用打下基础。 方法: 1 通过计数法测定肝癌细胞的生长曲线,获得该细胞系基本生长特性; 2 肝癌及胃癌细胞用含不同浓度(0,20,40,80,160和320 μmol/L)的塞莱西布的培养基培养,24小时后应用MTT测定生长抑制率,电镜、流式细胞技术来观察细胞凋亡情况; 3 肝癌细胞用含不同浓度的5-氟尿嘧啶(0.00001、0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100、1000、10000μg/m L)、阿霉素(0.02、0.039、0.078、0.156、0.313、0.625、1.25、2.5、5、10μg/mL)、顺铂(0.39、0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25、50、100、200μg/mL)及塞莱西布(80μmol/L)的培养液培养,应用MTT来测定生长抑制率,电镜、流式 第四军医大学硕士学位论文细胞技术来观察细胞凋亡情况; 4肝癌细胞用含80 p mol/L塞莱西布的培养基培养,分别用苏木精一伊红、Hoechst33258试剂以及免疫组化的方法染色。 结果: 1通过计数法绘出肝癌细胞的生长曲线; 2塞莱西布对两种细胞均具有生长抑制作用,并呈现量一效关系。通过电镜和流式细胞技术,可观察到明显的凋亡细胞; 3塞莱西布有明显的协同化疗药物抑制肿瘤细胞生长的作用(塞莱西布80 p mol/L,5一氟尿啼陡为0.00001 pg/mL时、阿霉素0.039 pg/mL、顺铂0.39 pg/mL时,实验组较对照组增加的细胞抑制率分别为12.3%、31.8%和82.8%),并呈现量一效关系。流式细胞技术、电镜下可观察到明显出现的凋亡细胞; 4通过苏木精一伊红染色法,观察到处理后细胞出现出现嗜酸性的浓染。通过Hoechst33258试剂染色,发现明显存在的凋亡细胞。通过免疫组化的方法,发现细胞内COX一2的含量在处理后明显降低。 结论: 1塞莱西布对不同来源的肿瘤细胞均具有一定的生长抑制作用及诱导肿瘤细胞出现凋亡的作用,这种作用不仅是剂量依赖性的并且还是异质性的; 2塞莱西布可以协同化疗药物,增强其对肿瘤细胞的杀伤作用,这种作用是异质性的; 3经过塞莱西布处理前后的肿瘤细胞内,COX一2蛋白的表达有比较明显的下降。
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