研究背景及目的:牙周炎是一种广泛存在的炎症性疾病,由牙龈菌斑中的特定口腔微生物导致,如牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体、福赛坦氏菌和伴放线聚集杆菌等,可造成牙周骨缺损,最终导致牙齿缺失。现在已有多种手段用于清除牙齿周围的菌斑,但牙周炎骨缺损的再生修复仍然是一个严峻的挑战。牙周韧带内的人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）是一种多能细胞,可通过组织工程技术移植至牙周骨缺损处再生牙周组织。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作为革兰阴性菌细胞壁中的微生物成分,促进牙周炎发生。LPS可通过激活NF-κB（nuclearfactor-κB,核转录因子κB）信号通路抑制hPDLSCs的成骨分化。Hippo信号通路的关键效应分子——TAZ（transcriptional coactivator with a PDZ binding motif,具有 PDZ 结合基序的转录共激活因子）,可以调控骨代谢,并促进hPDLSCs的成骨分化。同时YAP/TAZ可以抑制IKKα/β（inhibitor of kappa B kinase,kappa B 抑制因子激酶）的激活及影响 IκBα（inhibitor of nuclear factor-κB）的稳定,抑制NF-κB信号通路,证实NF-κB是YAP/TAZ的可能靶标之一。因此靶向TAZ或许可以影响NF-κB信号通路的激活从而改善因炎症导致的骨缺损。由此引出我们的研究目的:在LPS诱导hPDLSCs的炎症模型中,TAZ是否与NF-κB信号通路的激活有某种联系,此外,TAZ是否是阻止炎症性骨缺损的重要调控因子。实验方法:1、于人体离体牙牙周膜组织内分离提取hPDLSCs,流式细胞术进行表面标志物鉴定,茜素红染色、油红O染色确定其多向分化潜能,结晶紫染色证明其具有克隆形成能力,从而判定hPDLSCs为间充质来源干细胞。2、CCK-8 实验（cell counting kit-8）检测 LPS 对 hPDLSCs 增殖的影响。3、LPS刺激24h后,qRT-PCR技术检测LPS刺激下炎症相关基因的表达;使用免疫荧光技术确定NF-κB/P65入核情况,Western Blot评估NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况,从而明确LPS是否激活NF-κB信号通路;LPS刺激下并进行成骨诱导后,Western Blot评估成骨相关蛋白的表达情况,qRT-PCR技术检测成骨相关基因的表达;茜素红及碱性磷酸酶（ALP）染色评估hPDLSCs成骨表型变化。4、Western Blot及qRT-PCR技术检测LPS激活NF-κB信号通路抑制hPDLSCs的成骨分化的过程,是否与TAZ有关;慢病毒转染构建特异性敲低和过表达TAZ的hPDLSCs模型,LPS刺激24 h,免疫荧光检测NF-κB/P65入核情况,Western Blot检测NF-κB通路相关蛋白的表达;成骨诱导同时LPS刺激下,Western Blot检测成骨相关蛋白的表达,茜素红染色评估hPDLSCs矿化结节形成的多少,从而对成骨分化能力进行分析。实验结果:1、流式细胞术结果显示hPDLSCs与骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）具有相似的表面标记,同时具有克隆增殖的能力;此外进行了成骨及成脂向分化能力的检测,表明其具有多向分化的潜能。2、使用不同浓度LPS刺激hPDLSCs 2 d时,100μg/mL的LPS对细胞的增殖有一定的促进作用;而到了第4d、6d时,不同浓度LPS对hPDLSCs的增殖均无明显差异。3、LPS可引起明显的炎症反应,激活NF-κB通路,抑制hPDLSCs的成骨分化,并且在此过程中TAZ的表达明显降低。4、成功构建特异性敲低和过表达TAZ的hPDLSCs模型,敲低TAZ明显激活NF-κB通路,且明显加重LPS刺激下对hPDLSCs的成骨分化的抑制;过表达TAZ明显抑制NF-κB通路,且明显逆转LPS刺激下对hPDLSCs的成骨分化的抑制。实验结论:LPS激活NF-κB信号通路抑制hPDLSCs的成骨分化与TAZ有关;TAZ可明显影响NF-κB信号通路的激活,同时可明显逆转LPS刺激下激活NF-κB通路后对hPDLSCs的成骨分化的抑制。