高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是70年代迅速发展起来的一项高效、快速的分离分析技术,是现代分离测试的重要手段。鉴于其简便、快速、灵敏、准确的特点,目前,在医药、卫生、食品、环保等各个领域已得到广泛应用。　　 本文建立了高效液相色谱法研究血浆中妥布霉素、盐酸金刚烷胺及连翘苷的含量测定的新方法。论文包含两个部分。第一部分是综述,在这部分中简单概述了高效液相色谱的特点、色谱技术方面的进展、药物代谢动力学及其应用、高效液相色谱-荧光检测技术在血浆中药物分析的应用。第二部分是研究报告,在这部分中建立了血浆中妥布霉素、盐酸金刚烷胺的测定以及研究了这两种药物在体内动力学的方法和血浆中连翘苷的测定的新方法,主要包括:高效液相色谱测定大鼠血浆中的妥布霉素及药代动力学研究;荧光衍生化高效液相色谱测定大鼠血浆中的盐酸金刚烷胺;高效液相色谱-荧光检测法定量测定人血浆中的连翘苷。　　 本论文共分为四章。　　 第一章绪论　　 绪论在简单介绍高效液相色谱法的特点、色谱技术方面的进展的基础上评述了高效液相色谱的研究进展。同时简述了药代动力学及其应用、高效液相色谱-荧光检测法在血浆中药物分析的应用。　　 第二章高效液相色谱测定大鼠血浆中的妥布霉素及药代动力学研究　　 建立了一种简单的测定静脉注射妥布霉素后大鼠血浆中浓度的动态变化及药动学参数的反相高效液相色谱法。以奈替米星为内标,用乙腈沉淀蛋白质的方法处理血浆。处理后的血浆样品用氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)为衍生试剂,在pH为6.5、室温条件下反应15 min后,用Phenomenex Gemini5μC18(150×4.6 mm,5μm)柱进行分离:流动相为乙腈-水(94:6,V/V),流速为1.0 mL/min:荧光激发波长和发射波长分别为265,315 nm。方法的线性范围为0.12～10.48μmL(R=0.9997),检测限(S/N=3,进样量为20μL)为0.074μg/mL,日内、日间RSD均小于6.00％,回收率为90.17％～103.40％,反应溶液中的衍生产物在24 h内稳定性良好。本方法简便、快速、灵敏,为妥布霉素在大鼠体内药代动力学的研究提供了可靠的生物分析手段。　　 第三章荧光衍生化高效液相色谱测定大鼠血浆中的盐酸金刚烷胺　　 建立了一种简单、有效的测定血浆中盐酸金刚烷胺的高效液相色谱荧光检测方法,并研究了该药物在大鼠体内的药代动力学特征。采用乙腈沉淀蛋白质处理血浆样品,并以新霉素为内标物,氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)为衍生试剂衍生后,产物在Gemini-C18 column(150×4.6mm,5μm,Phenomenex,CA,LISA)上分离,流动相为乙腈-水(体积比为90:10),流速为1.0mL/min,柱温为25℃,荧光激发和发射波长分别为265 nm和315nm。血浆中盐酸金刚烷胺的线性范围为0.038～2.43μg/mL,相关系数为0.9997;最低检测限(S/N=3)为0.022μg/mL;回收率范围为93.17～104.47％:日内、日间RSD均低于6.00％。该检测方法简单、快速、有效、避免了繁琐的液液提取过程,适用于血浆中盐酸金刚烷胺的测定,并且成功运用于盐酸金刚烷胺在大鼠体内药代动力学的研究。　　 第四章高效液相色谱-荧光检测法测定人血浆中的连翘苷　　 建立了一种简便、灵敏有效的反相高效液相色谱法测定人血浆中的连翘苷。血浆样品经乙酸乙酯提取后,在Gemini-C18 column(150×4.6 mm,5μm,Phenomenex,CA,USA)上进行分离,流动相为甲醇-水(50:50,V/V,pH2.9),流速为0.8 mL/min,柱温为35℃,荧光激发和发射波长分别为277 am和315 am。血浆中连翘苷的线性范围为0.0313～8.0μg/mL(R≥0.999);检测限(S/N=3,进样量为20μL)为6.31 ng/mL;血浆中连翘苷的平均回收率为101.02％;日内、日间RSD均小于10.00％。实验结果表明该方法选择性好,灵敏度高,准确度和精密度都较好。