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重楼为百合科重楼属重要的药用植物,其中,重楼皂苷I、II、VI、VII,薯蓣皂苷及薯蓣皂苷元,是其主要的药用成分及前体,临床上主要用于抗菌消炎、止血止痛、抗肿瘤等治疗,为中成药云南白药和宫血宁胶囊等的重要原材料。由于重楼生长缓慢、成熟周期长及人为滥挖滥采等因素,导致其野生资源严重枯竭。本研究从重楼块茎及种子分离内生菌,从中筛选出能够代谢产生皂苷(元)的内生菌,并对其进行菌株鉴定、分析及发酵条件的优化,为进一步开发利用重楼内生菌资源,利用微生物发酵途径解决重楼药用资源紧缺的现状奠定了基础。本文还对能够促进种子萌发的重楼内生菌进行了初步的筛选。主要研究结果如下:(1)从重楼块茎及种子分离得到149株重楼内生菌,进一步利用液相色谱、质谱等技术筛选出了2株能够代谢产生重楼皂苷VI的内生菌clx-6及clx-60,1株能够代谢产生重楼皂苷I的内生菌clx-14,1株能够代谢产生薯蓣皂苷元的内生菌clx-74;并分别进行了初步的菌属鉴定,其中其中clx-6为大肠杆菌属(Escherichia sp.)的细菌,clx-14为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae),clx-60为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens strain),clx-74为产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes strain)。(2)针对分离到的菌株进行了一次促进种子萌发能力的筛选,结果表明不同内生菌的发酵液经氯仿萃取的成分能够一定程度的促进冬小麦种子的萌发,而水相提取物则不能,推测促进萌发的物质位于有机相内;而且不同菌株的有机相萃取物促进种子萌发的能力有所不同,菌株clx-74的石油醚萃取物、clx-108的氯仿萃取物、clx-138的氯仿萃取物、clx-149的乙酸乙酯萃取物促进萌发的作用较好(p<0.05);菌株clx-138的氯仿相萃取物的1/2稀释液促进萌发的作用最好(p<0.01)。(3)对能够代谢产生重楼皂苷I的clx-14菌株的发酵培养基组分和培养条件进行了优化,最终确定该菌株的培养基最适配方为:蔗糖12 g/L,豆粕15 g/L,MgCl2 15 g/L,最佳培养条件为:培养温度34℃,初始培养基pH值6.0,摇床转速150 r/min。经优化之后,菌株clx-14在最适培养基的最佳培养条件下重楼皂苷I的产量为0.338 mg/L,相比之前的产量:0.181 mg/L,提高了86.74%。