论文部分内容阅读
目的糖尿病黄斑水肿是成人视力受损的重要原因之一,其发病机制主要与血-视网膜屏障受损有关。抗VEGF药物玻璃体腔注射已成为治疗该病的重要手段之一,但并非所有患者对该药物反映良好。二甲双胍作为一种传统降糖药,近年来在抗肿瘤、抗衰老等领域研究颇多。本研究旨在探究康柏西普与二甲双胍的联合应用对视网膜血管内皮细胞的协同作用及可能机制,为临床治疗提供理论基础。方法回顾性分析2016年1月~2016年12月于天津医科大学眼科医院因糖尿病黄斑水肿行玻璃体腔注射康柏西普的患者,对比服用二甲双胍组与未服用二甲双胍组视网膜中心凹厚度(CRT)改变情况。体外培养RF/6A,将细胞分为五个组:对照组、VEGF刺激组、VEGF+康柏西普刺激组、VEGF+二甲双胍刺激组、VEGF+康柏西普+二甲双胍刺激组。设置VEGF、康柏西普及二甲双胍浓度梯度,用1640完全培养基将其稀释,利用MTT比色法选取药物最佳浓度及实验观测时点;用MTT细胞增殖实验检测两种药物联合应用对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖的影响;通过细胞划痕实验观察两种药物联合应用对VEGF诱导的RF/6A细胞迁移能力的影响;通过FQRT-PCR检测药物作用下RF/6A细胞血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、蛋白激酶C-α(PKC-α)和蛋白激酶C-β(PKC-β)的基因表达情况。结果10例(12眼)患者纳入数据分析,对比术后3月CRT恢复率,二甲双胍组明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。50ng/ml为VEGF的最佳刺激浓度;2.5ug/ml为康柏西普最佳给药浓度;2.0mmol/L为二甲双胍最佳给药浓度;72h为最佳观测时点。MTT细胞增殖实验结果显示:与对照组(0.5136±0.0311)及VEGF刺激组(0.8179±0.0288)相比,干预组细胞增殖明显受到抑制(P<0.001);联合用药组(0.2991±0.0323)与单独应用康柏西普组(0.3408±0.0274)相比,OD值显著降低(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示:与对照组相比,VEGF组细胞迁移率显著升高(P<0.001);与VEGF组相比,干预组细胞迁移率显著降低(P<0.05);12h时,联合用药组(0.1085±0.0141)与康柏西普组(0.1324±0.0379)相比,细胞迁移率显著降低(P<0.05)。FQRT-PCR实验结果显示:与对照组相比,VEGF组VEGFR2、PKC-α和PKC-β的基因表达量均显著升高(P<0.01);联合用药组与VEGF组相比,VEGFR2、PKC-α和PKC-β的基因表达量均显著降低(P<0.05);联合用药组与康柏西普组相比,PKC-α的基因表达量显著降低(P<0.05)。结论因糖尿病黄斑水肿行玻璃体腔注射康柏西普的患者,二甲双胍对药效时间有一定积极作用。联合应用康柏西普及二甲双胍,可以抑制VEGF所引起的血管内皮细胞生物学改变及相关基因的表达,且作用明显优于单独应用康柏西普。