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烟粉虱Bemisia tacbaci (Gennadius)作为双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金黄花叶病毒属(Begomovirus)传播的唯一媒介昆虫,在病毒传播过程中起着至关重要的作用。近年来烟粉虱-双生病毒互作方面的研究相继增多,但在分子水平上阐述烟粉虱与病毒的互作关系还不深入。本实验室已有研究表明,番茄黄曲叶病毒侵染后,能在烟粉虱体内检测自噬的现象,而自噬的激活又反过来抑制病毒在烟粉虱体内的积累。但是对烟粉虱传播病毒的特异性机理的探讨,还有一些问题需要明确,如：(1)烟粉虱体内自噬如何发生?(2)病毒又是如何利用自噬?(3)是否只有非选择性的自噬发生在病毒侵染的烟粉虱体内?(4)是否所有的双生病毒侵染的烟粉虱都能检测到自噬?明确这四个问题能够为进一步探究烟粉虱先天免疫机制提供参考,从而为阐明烟粉虱传播病毒的特异性机理提供依据。本研究探讨TYLCV、TYLCCNV、 PaLCuCNV三种双生病毒侵染对MEAM1烟粉虱自噬途径的影响,以明确自噬在烟粉虱抵御病毒侵染过程中的作用；采用透射电镜从形态学上分析TYLCV侵染的MEAM1烟粉虱中自噬“fluz”的出现；采用抑制剂和RNA干扰阻断自噬通路,来验证病毒和自噬的关系；采用特异性诱导剂和抑制剂处理ME AMI烟粉虱,分析病毒在烟粉虱体内的积累以及烟粉虱传播病毒的效率,最后验证自噬在TYLCV与寄主昆虫互作过程中所起的作用。本研究还通过探索不同的双生病毒在MEAM1烟粉虱体内的积累,来探究病毒增殖是否与烟粉虱自噬相关,为自噬与病毒增殖的研究提供了方向。最后,本研究初步探索了TYLCV侵染MEAM1烟粉虱后疑似选择性自噬的出现,为选择性自噬可能出现在昆虫中这一现象提供证据。(1) TYLCV侵染对ME AMI烟粉虱自噬"flux"的影响TYLCV侵染烟粉虱后,TEM检测结果表明自噬"flux"出现;Western Blot检测结果进一步证明自噬不仅仅是某一点的现象,而是一个通量的变化；免疫荧光结果显示TYLCV-CP与自噬体的关联；说明MEAM1烟粉虱受到TYLCV侵染后,自噬通路被激活。(2)自噬对TYLCV在ME AMI烟粉虱体内积累的影响自噬抑制剂处理ME AMI烟粉虱后,qPCR、Western Blot检测结果都显示TYLCV-DNA和TYLCV-CP在烟粉虱体内的积累量显著增多。传毒实验也表明,自噬被抑制后传毒效率显著提高。RNAi实验也证明,在阻断自噬通路后,TYLCV在MEAMl烟粉虱体内的积累量也显著增多。以上实验结果都说明,抑制自噬通路能够促进TYLCV在MEAMl烟粉虱体内的积累及传毒效率的提高。(3) TYLCCNV、PaLCuCNV对MEAMl烟粉虱自噬途径的影响Western Blot结果显示MEAMl烟粉虱在被TYLCCNV感染后,MEAMl烟粉虱中自噬标记蛋白LC3-Ⅱ周转明显提升,与TYLCV侵染后的结果相似。结果表明TYLCCNV侵染MEAMl烟粉虱也同样能够激活自噬途径。但是PaLCuCNV侵染MEAMl烟粉虱并不能激活自噬。同时TYLCV不能穿透温室白粉虱的中肠屏障,也不能激活自噬途径。(4) TYLCV侵染MEAMl烟粉虱体内疑似选择性自噬的出现TYLCV持续侵染MEAMl烟粉虱后,TEM检测结果发现,受损的线粒体被自噬体吞噬,线粒体自噬体的出现表明TYLCV侵染MEAMl烟粉虱中可能出现线粒体自噬。此外,免疫荧光共定位分子伴侣介导的自噬标记蛋白LAMP-2A与TYLCV-CP,为TYLCV侵染MEAMl烟粉虱中可能出现分子伴侣介导的自噬提供初步证据。