骨形态发生蛋白-2与纤维连接蛋白和音猬因子复合纳米晶胶原基骨修复大鼠骨缺损的研究

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目的:研究骨形态发生蛋白-2(bone morphogeneticprotein,BMP-2)与纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和音猬因子(sonic hedgehog,shh)复合骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymalstem cells,MSCs)修饰纳米晶胶原基骨(nano-Hydroxyapatite/collagen,nHAC)治疗大鼠骨缺损的能力。方法:SD大鼠的MSCs分离培养后,分为四组:对照组:单纯的纳米晶胶原基骨(nHAC);实验组A:BMP-2与shh修饰纳米晶胶原基骨((BMP-2+shh)-nHAC);实验组B:BMP-2与FN修饰纳米晶胶原基骨((BMP-2+FN)-nHAC);实验组C:BMP-2与FN和shh修饰纳米晶胶原基骨((BMP-2+FN+shh)-nHAC)。通过检测不同时间点(3,6,9,12天)各组细胞数量、细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、成骨细胞表型检测和Ⅰ型胶原蛋白免疫印迹分析后再分为三组植入由30只SD大鼠按照随机数字表法分三组制成股骨缺损模型,a组:缺损处植入单纯nHAC;b组:植入MSCs/nHAC复合物;c组:植入复合FN/shh/BMP-2/MSCs/nHAC复合物。术后3、6、9、12周行影像学和组织学观察;术后12周行环境扫描电镜(Environment scanning electron microscope,ESEM)观察。结果:各组细胞形态,成骨细胞表型检测和Ⅰ型胶原蛋白含量都发生了变化:各组的细胞数和ALP活性随着培养时间的延长而增加,但C组变化最明显,与相同时间点其他各组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。植入股骨缺损后见:①各试验点动物均未出现排斥及炎症反应,创口愈合良好。②术后3、6、9、12周C组与其余两组放射学检查评价骨生成差异有显著性意义(P<0.01)。③组织学检查结果显示b.c组较a组能更快的促进鼠股骨缺损处骨再生;c组的促进作用更明显。结论:MSCs/FN/shh/BMP-2/nHAC复合物较单纯nHAC及nHAC/MSCs复合物更好的成骨能力,对节段性骨缺损有较好的治疗效果,可望成为骨组织工程中可选择的新型植入材料。
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