移植物抗宿主病是影响同种异基因造血干细胞移植患者生存、复发及生活质量的主要并发症。急性移植物抗宿主病（aGVHD）主要影响受者肝脏、皮肤、肠道等脏器功能。减低毒性的非清髓预处理方案既能获得较好的治疗效果又可降低移植相关毒性，主要应用于老年患者。单倍体相合造血干细胞移植因解决了供髓来源问题而拥有良好的临床治疗优势。NKp46是NK细胞的活化性受体之一，其表达水平与杀伤活性密切相关[1]，活化的NK细胞具有很强的杀伤肿瘤细胞的作用。NK细胞是同种异基因造血干细胞移植后首先恢复的免疫细胞[2-3]，其在aGVHD病理损伤方面的机制尚未见深入研究。NK细胞杀伤作用无MHC限制性、无需抗原刺激[4]，在造血干细胞移植中的作用备受关注，多数研究认为NK细胞在造血干细胞移植后发挥GVL效应的同时可减轻aGVHD。NK细胞通过其免疫球蛋白样受体（KIR）和HLA-Ⅰ类分子错配在移植后杀伤受者树突状细胞阻断了其向供者T细胞提呈宿主抗原的过程而减轻移植物抗宿主病，供者衍生的NK细胞通过裂解宿主T淋巴细胞来阻止对移植物的排斥[5]。NK细胞也参与移植并发症的转归，通过分泌IFN-γ及直接的毒性作用在控制巨细胞病毒的感染中发挥积极作用[6-7]，消化道黏膜中存在特殊的NK细胞亚群，可促进消化道aGVHD损伤后的黏膜再生[8]，Small C研究认为肺部的NK细胞可以发挥抗感染和促进上皮细胞再生来参与移植后肺部感染的抵抗和修复[9]。本研究以小鼠非清髓单倍体相合骨髓移植模型为对象，探讨NK细胞在aGVHD靶器官部位的免疫病理及NKp46表达强度与aGVHD发生的关系。以C57BL/6（H-2b,♂）为供鼠，CB6F1(Balb/c×C57BL/6, H-2b/d，♀)为受鼠，建立非清髓单倍体相合骨髓移植动物模型。将受鼠按预处理方式分为单次全身照射组与分次全身照射组，每组均分为3组：对照组、小剂量移植组、大剂量移植组。单次照射组小鼠接受环磷酰胺200mg.kg-1（-2,-1d）腹腔注射及60Co450cGy全身照射（0d），照射剂量率为133cGy.min-1。分次照射组小鼠移植前接受环磷酰胺200mg.kg-1（-1d）腹腔注射及60Co200cGy分次全身照射（-2,-1d,两次照射间隔24h，照射剂量率为66cGy.min-1。移植当天CB6F1接受供鼠骨髓细胞3×107和脾脏细胞6×107或1×108尾静脉注射移植，对照组小鼠注射等体积生理盐水。移植后观察小鼠发生aGVHD的症状体征、流式细胞测定移植嵌合率及NKp46表达强度，采集发生aGVHD小鼠皮肤、肝脏、肠道靶器官标本HE染色观察病理学改变、免疫荧光染色观察靶器官部位NK细胞分布。预处理单次全身照射组小鼠大小剂量移植均未发生aGVHD，预处理分次全身照射小鼠80%发生了aGVHD。移植后15d分次全身照射组小鼠已100%达到完全嵌合，第25d左右小鼠出现了体重减轻、耸毛、弓背、活动度减低、皮毛不完整等aGVHD典型表现。NK细胞活化受体NKp46平均荧光强度值在小鼠出现aGVHD症状后的两次检测中，发生aGVHD小鼠的NKp46平均荧光强度值均低于未发生aGVHD小鼠。未发生aGVHD的移植鼠肝脏组织内NK细胞少量散在分部在肝实质细胞间，发生aGVHD移植鼠肝脏组织汇管区周围有NK细胞浸润。本实验证明在非清髓单倍体相合骨髓移植中NK细胞参与了肝脏处移植物抗宿主病的病理反应，NK细胞活化受体NKp46表达强弱与aGVHD的发生相关，NKp46表达强度可能为aGVHD诊断提供依据。