复杂异型缝隙连接通道和磷酸化对心脏细胞通讯的调控

来源 :武汉大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chen_gm
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目的:检测由心脏缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)和Cx45组成的复杂异型缝隙连接通道和磷酸化对缝隙连接(gap junction,GJ)的作用,以探讨复杂异型GJ通道对心脏细胞通讯的调控机制.方法:将转染了编码为鼠Cx43、鸡Cx45或同时两种编码的蛋白质均有的质粒DNA的Hela细胞放置在一起共同培养组成双侧和单侧异型GJ通道.蛋白免疫印迹法证实转染后的相关Cx已经在Hela细胞传代繁殖.通过紫外光指引下显微注射荧光素黄(Lucifer yellow,LY)或若丹明123(Rhodamine,RH)后,检测经蛋白激酶C激活剂、十四(烷)酰佛波醇乙酸酯(12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetae,TPA)处理前后的由Cx43和Cx45所组成的多种复杂异型GJ通道对荧光染料的偶联率.另外,应用双侧全细胞电压钳技术检测各型GJ通道的交界总电导率(gj)、电压门控及单元电导率(γj)等电生理特性.结论:由不同心脏Cx所组成的复杂异型GJ通道的生物物理学特性不同于那由单种Cx所组成的同型GJ通道,它为一全新的减小了通道孔径的GJ通道,使细胞间的通讯降低.这提示由不同Cx的组合及其它们的相互作用所形成的复杂异型GJ通道作为调节细胞间通讯的主要机制.此外,磷酸化作用也参与GJ通道的调控.
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