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本研究利用以PCR为基础的STS(Sequence-tagged site)和SCAR(Sequence characterized amplified region)技术对ThLr35及ThLr35的F1代、F2代进行检测,并对149个小麦品种进行分子标记分析鉴定,结果如下: 1.对STS、SCAR反应体系及反应程序中的一些重要参数优化选择,建立了适宜的小麦基因组STS、SCAR反应体系及程序:25μLPCR反应体系中基因组DNA 50ng,1×PCR缓冲液(Mg2+),每个dNTP 0.2mM,Taq DNA聚合酶1.5U,每条引物25ng。扩增反应程序为:94℃,5min,一个循环;94℃,1min,52℃-STS 1min或60℃-SCAR 1min,72℃,2min,30个循环;10min,72℃延伸;4℃保存。 2.对ThLr35的F1代植株进行PCR-STS和PCR-SCAR检测,扩增结果表明F1代中有900bp的DNA片段,说明ThLr35的F1代含有Lr35基因。F2代中表现感病的植株没有900bp的DNA片段,表现抗病的植株有900bp的DNA片段。重复4次结果相同,进一步验证了与小麦抗叶锈基因Lr35紧密连锁的STS和SCAR标记的稳定可靠。 3.利用以PCR为基础的STS和SCAR分子标记技术,对149个小麦品种的叶锈抗病性进行分子分析,证明其中的8个小麦品种(6068,白蚰包,中麦9,早洋,碧玛1号,小偃7631,东方红3号,Madsen)含有Lr35基因。国际首次明确中国含Lr35基因的品种资源,为中国乃至世界培育成株抗病品种奠定了基础,提供了信息资源,同时该研究的成功为分子辅助选择在育种中的应用奠定了基础。 4.室内接种鉴定技术(叶锈菌株是对Lr35无毒力的99/5/16/5)证明这8个小麦品种在抗病表现上具有一定差异,其中东方红3号与其它品种差异较大。 5.将这8个小麦材料进行系谱分析,东方红3号的系谱组合是:农大45(农大17/小鹅186/早洋)选系,能明确东方红3号与早洋的亲缘关系,两者之间可能会存在抗病基因Lr35的遗传事实。其余6个小麦品种和这两个小麦品种彼此之间具体的关系,目前并不能从系谱上明确地确定。它们的抗性基因有可能是从斯卑尔脱山羊草中获得的。