猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸征病毒(PRRSV)引起的妊娠母猪、公猪生殖障碍及仔猪呼吸障碍为特征的疾病,是严重危害世界养猪业的疾病之一。其病原PRRSV可分为美洲型和欧洲型,我国分离的PRRSV大多数为美洲型。本研究分别建立了美洲型的病原学和血清学的诊断方法。参照美洲型PRRSV M基因序列,设计引物和探针,建立荧光RT-PCR检测方法,用于该型病毒的检测。对梯度稀释的阳性对照的检测可知所建立的荧光RT-PCR方法的敏感性比普通RT-PCR高10~3～10~4倍。用该方法检测从病毒液中提取的RNA,可以推测出最低可检测到1 TCID50。并用此法检测猪瘟病毒、乙脑病毒、伪狂犬病毒、马动脉炎病毒、圆环病毒Ⅱ型和MARC145细胞的RNA,结果均为阴性。对126份临床样品进行了检测应用,检测结果(7份阳性,119份阴性)与病毒分离完全符合。本研究建立的检测方法以体外转录的dsRNA为阳性对照,具有高度的稳定性,解决了类似检测方法中RNA阳性对照易降解的难题。在现有的单克隆抗体1G10的基础上,通过各种条件的摸索和优化,初步建立起单抗捕捉ELISA检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征血清抗体的方法。该方法的单抗最佳包被浓度为2.64μg/ml,病毒最佳稀释度为17.51μg/ml。用该方法检测标准猪瘟病毒阳性血清、猪细小病毒阳性血清、猪布氏杆菌阳性血清、猪乙脑病毒阳性血清以及猪伪狂犬病毒阳性血清,结果均为阴性。在检测攻毒猪的血清试验中,得知该方法的敏感性为19/22与IDEXX试剂盒敏感性一致。应用此方法对266份临床血清样品进行检测,并同时与间接N-ELISA检测方法和IDEXX试剂盒平行检测比较。初步结果表明,单抗捕捉ELISA和间接N-ELISA的阳性检出率均比IDEXX试剂盒的高。