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背景和目的： 上皮根鞘(Hertwigs epithelial root sheath，HERS)作为启动牙根的信号中心，在牙根发育中必不可少。牙根的正常生理过程与HERS完整的形成、适时的断裂及细胞增殖、凋亡密切相关。牙本质发育不良Ⅰ型(Dentin dysplasia typeⅠ，DD-Ⅰ)又称为根部牙本质发育不良，是一种牙根严重发育不良导致根短小、畸形的常染色体显性遗传病。细胞液泡分选蛋白4B(Vacuolar protein sorting4B，VPS4B)是一种多功能蛋白，在调控细胞增殖凋亡、溶酶体降解、细胞内蛋白转运等过程中起重要作用。本课题组前期对一个DD-Ⅰ家系外周血全基因组测序发现该家系致病基因为VPS4B;并且研究表明VPS4B可能是影响牙齿发育的重要基因，但是其在牙根发育过程中的具体作用不是很清楚。本实验通过Vps4b基因敲除小鼠模型，观察HERS在牙根发育过程中的形态变化，分析该基因突变对HERS细胞增殖、凋亡能力的影响，进而探讨该基因在牙根致畸中的可能作用。 材料与方法： 将Vps4b基因敲除小鼠雌雄合笼交配，记录出生后（Postnatal，P）时间。分别于P5天、P9天、P11天、P15天、P19天引颈处死解剖分离下颌第一磨牙区下颌骨和小鼠尾巴。新生幼鼠的基因型使用PCR技术进行鉴定。将幼鼠下颌骨采用4％多聚甲醛溶液固定、10％EDTA脱钙、石蜡包埋，制备切片，使用苏木精-伊红(Haematoxylin and eosin，HE)染色的方法确定各组小鼠牙根发育时期，免疫组织化学方法对不同时期HERS细胞内细胞角蛋白14(Cytokeratin14，CK14)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)以及B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）进行组织定位，对比野生小鼠和Vps4b基因敲除小鼠CK14、PCNA、Bcl-2蛋白表达的差异。 结果： PCR的检测结果显示子代小鼠基因型为正常型Vps4b+/+和杂合型Vps4b+/-两种。正常小鼠HE染色显示:小鼠P5天HERS形成，牙根发育开始;P9天HERS结构连续，根分叉结构形成;P11天HERS发生断裂;P15天根1/3开始形成;P19天牙根发达到生理性长度，HERS继续断裂，其末端保持完整。正常小鼠免疫组织化学染色结果:P5天，HERS形成双层细胞结构，HERS细胞PCNA阳性表达，Bcl-2无表达;P9天，HERS仍连续并继续延伸，HERS细胞PCNA强阳性表达，Bcl-2阳性表达;P11天，HERS开始发生断裂，HERS末端保持完整，牙颈部有少量细胞PCNA阳性表达，HERS末端部分PCNA强阳性表达，Bcl-2在HERS细胞中弱阳性表达;P15天，牙根表面很少见到PCNA阳性的HERS细胞，HERS末端PCNA仍强阳性表达，HERS细胞Bcl-2弱阳性表达;P19天，牙根发育基本完成，仅HERS末端PCNA阳性表达，Bcl-2阴性表达。Vps4b基因敲除后抗CK14蛋白显示HERS在P9天开始发生断裂，P15天以后HERS不连续，HERS细胞数量减少，并形成细胞簇附着在牙根表面;与正常小鼠相比，PCNA在HERS细胞中表达强度变弱（P＜0.05），HERS细胞仅在P9天、P11天Bcl-2呈阳性表达并且表达强度减弱（P＜0.05）。 结论： 在Vps4b+/-小鼠牙根发育过程中HERS的连续性过早中断，提示Vps4b基因的缺失影响HERS正常形态的形成。HERS细胞PCNA、Bcl-2的表达强度减弱，推测Vps4b可能通过调节HERS细胞的增殖、凋亡进而影响牙根的发育。