黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2参与C9醛类香气合成功能的初步研究

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独特的芳香气味是黄瓜的重要特色。在黄瓜的主体香气成分中,C6和C9醛及相应的醇类具备不同的香气特征,其含量及比例对黄瓜果实风味有重要的影响。脂氧合酶(Lipo xyge na se,LO X)是黄瓜果实醛类香气形成过程上游的第一个关键酶,其对游离的脂肪酸的催化位置决定了黄瓜果实中C6、C9醛的含量高低。前期的研究发现,在黄瓜果实中表达的LOXs基因有12个,但哪一个成员参与到C9醛类的产生尚不明晰,因此,本试验在结合黄瓜果实不同发育时期醛类香气含量以及不同CsLOXs的表达模式的基础上,推测CsLOX2基因(C9型)参与到C9醛的合成中,并对CsLOX2基因的功能进行了初步研究,得到以下结论:  1.对黄瓜果实发育进程中的C6和C9醛类物质含量的变化进行了分析 结果表明, C6、C9醛和相应醇的含量在果实发育前期(0~6 d)含量较高,花后8 d显著下降;其中C6醛和相应的醇在果实发育前期(0~8 d)含量较高,占总醛类的12%~23%,而在果实发育的后期(10~14 d)C9醛和相应的醇含量较高,占总醛类物质的95%左右。  2.对果实中不同发育进程的CsLOXs的表达模式及其与C9醛的关系进行了分析,4个9-LOX型的脂氧合酶基因CsLOX2、CsLOX8、CsLOX9、CsLOX10的表达模式不同,其中CsLOX2、CsLOX9随着果实发育进程的表达呈现先上升后下降的趋势, PCA分析结果表明, 14种质中和26种质中, CsLOX2的表达与C9醛类挥发物的相关性较强。  3.构 建 了 CsLOX2 的 过 表 达载 体 pB2HA-CsLOX2和干 扰 表 达载 体pART27-CsLOX2RNAi,并分别对黄瓜进行了遗传转化,经过初步的PCR阳性检测和抗性筛选,获得了13棵过表达转基因植株和17个干扰表达转基因抗性芽。  4.构建了原核表达载体32a-CsLOX2,通过诱导得到了大小约为84 kDa的重组蛋白。
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