论文部分内容阅读
目的:类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一病因未明的系统性疾病,特点是慢性、多关节炎症,最后导致软骨和骨的破坏。其主要病理特点是滑膜细胞增生、衬里层增厚、多种炎性细胞浸润、血管翳形成,以及软骨和骨组织的破坏。近年来的研究表明,RA的软骨破坏与细胞因子网络失调及软骨基质的降解有密切的关系。目前主要的治疗方法为早期应用免疫抑制剂来抑制关节的骨破坏,控制病情发展。临床上应用丹参酮Ⅱa治疗RA取得了较好的疗效。本文旨在成功建立佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)模型的基础上观察丹参酮Ⅱa对大鼠关节炎的治疗效果,并检测其对模型鼠血清白介素-1(interleukin-1,IL-1)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα、TNF-α)水平及滑膜基质金属蛋白酶3(Matrixmetalloproteinase 3,MMP3)和组织金属蛋白酶抑制物1(Tissue inhibitor ofmetalloproteinase 1,TIMP1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:(1)选取50只Wistar雄性大鼠,随机分为五组:正常组、模型组、丹参酮Ⅱa组、来氟米特组、配伍组(丹参酮Ⅱa+来氟米特)。除正常对照组外,每组大鼠右足皮内注射弗氏完全佐剂0.1ml制作关节炎模型。(2)在造模后第18天,除模型组外,各用药组分别连续给药14天,在造模及用药前后观察大鼠的一般情况,并记录体重;根据排水法原理用容积测量仪测量大鼠后足体积,并记录关节炎指数,观察药物对继发病变的治疗作用。(3)用放射免疫法测定IL-1、IL-6、TNF-α水平。(4)采血后摘取踝关节进行固定、脱钙、石蜡包埋,HE染色,光镜下观察关节病理变化,并进行评分。(5)无菌取出踝关节处的滑膜组织,应用免疫组化检测滑膜组织中的MMP3及TIMP1的表达,并采用计算机图像分析的方法对其表达量进行定量分析。(6)应用SPSS14.0统计软件进行统计分析。结果1与模型组比较,丹参酮Ⅱa组、来氟米特组、配伍组均能改善大鼠的一般情况;配伍组给药前后体重增加值与正常组比较,差异无显著性(P＞0.05);与模型组比较,差异有显著性(P＜0.05)。2造模后18天各组大鼠之间的关节炎指数与足爪肿胀相比无明显差异(P＞0.05);给药后,丹参酮Ⅱa组、来氟米特组、配伍组均能减轻大鼠的足爪肿胀和关节炎指数,与模型组比较,差异显著(P＜0.05);配伍组较来氟米特、丹参酮Ⅱa组的作用更明显(P＜0.05)。3模型组的IL-1、IL-6、TNF-α水平明显高于正常对照组(P＜0.01),用药后各组的细胞因子水平较模型组降低(P＜0.05),配伍组的降低更明显(P＜0.01)。4病理结果显示:模型组大鼠踝关节滑膜组织内有大量的炎性细胞浸润,关节面不完整,有血管翳形成;治疗后,滑膜组织内炎性细胞浸润明显减轻,软骨破坏程度减弱。与正常对照组比较,模型组大鼠踝关节的病变积分显著增高(P＜0.01);各用药组的大鼠关节病变积分与模型组比较,皆明显下降(P＜0.05),三个用药组之间比较,配伍组的关节病变积分最低。5免疫组化定量分析,模型组大鼠滑膜组织MMP3表达阳性密度显著高于正常对照组(P＜0.01);与模型组比较,各用药组的MMP3表达阳性密度均降低(P＜0.01);配伍组的表达阳性密度与单一用药组比较,差异显著(P＜0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠滑膜组织TIMP-1的表达阳性密度明显降低(P＜0.05)。各用药组的TIMP-1表达阳性密度均明显高于模型组。配伍组的表达密度与单一用药组比较有差异(P＜0.05)。6 IL-1、病理积分与MMP3的相关性分析本实验得出结论:(1)IL-1与MMP3水平之间成正相关(r=0.9051,p=0.0001);(2)病理积分与MMP3水平之间成正相关(r=0.8961,p=0.0001)。这说明MMP3在RA的软骨破坏中起着重要的作用。IL-1是MMP3的重要调节因素。丹参酮Ⅱa能够抑制血小板凝聚,影响IL-1的分泌,减少了IL-1对滑膜和软骨的刺激,使MMP3对细胞外基质的降解减轻,从而减弱了RA的软骨破坏。结论1丹参酮Ⅱa治疗佐剂性关节炎具有显著疗效,能够明显减轻大鼠的足爪肿胀,降低血清IL-1、IL-6、TNF-α水平;减轻关节的病变损伤积分,减少滑膜组织中MMP3的表达,增力TIMP1的表达。配伍组的效果优于丹参酮Ⅱa、来氟米特组,证实了中药有效成分与西药配伍应用在实验性关节炎中的增效作用。2丹参酮Ⅱa治疗类风湿关节炎的可能机制是(1)丹参酮Ⅱa通过改善血循环,抑制血小板凝聚,减少血清炎性细胞因子的分泌。(2)通过减少细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α的分泌,减轻其对滑膜组织和软骨组织的刺激,抑制从大鼠滑膜组织MMP3的过度表达,调整MMP3/TIMP1的失衡,从而减轻关节炎的症状和软骨破坏。