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目的:
本研究以小鼠脑出血模型为研究对象,采用神经功能评分、脑含水量检测、HE染色、Western blot检测、免疫组化等方法,研究破血化瘀、填精补髓中药汤剂是否通过调节Nrf2改善脑出血小鼠神经损伤程度,抑制细胞凋亡。
方法:
将正常野生型小鼠和Nrf2基因敲除(Nrf2-/-)小鼠各78只,共156只,分别随机分成假手术组、模型组和方剂组三个组别,每组26只。参考Rynkowski造模方法,采集小鼠尾动脉血注射进鼠脑,制备脑出血模型。造模成功后,对各组模型进行神经行为学评分(Garcia),评价神经功能缺损情况,利用干湿重法测量脑含水量,用HE染色法观察小鼠脑组织病理形态变化,从而研究破血化瘀、填精补髓中药汤剂的干预效果。采用Western blot、免疫组化法检测小鼠脑组织Caspase-3、Bax、Bcl-2表达变化,探讨破血化瘀、填精补髓中药汤剂对小鼠脑组织细胞凋亡的影响。
结果:
1.方剂组小鼠Garcia神经行为学评分高于模型组(P<0.05),野生组与基因敲除组比较,存在显著差异(P<0.05)。
2.模型组小鼠脑含水量较假手术组增加明显(P<0.05),方剂组脑含水量与模型组比较下降明显,野生组与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
3.模型组与方剂组HE染色均显示脑组织病理变化明显,但方剂组的脑组织破坏较模型组小鼠轻,野生组与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
4. Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达,模型组和方剂组Caspase-3、Bax表达高于假手术组(P<0.01),Bcl-2表达低于假手术组;方剂组Caspase-3、Bax低于模型组(P<0.05), Bcl-2高于模型组(P<0.05)。方剂组与基因敲除方剂组相比, Caspase-3无明显差异,Bcl-2、Bax具有明显差异(P<0.05)。方剂组Caspase-3、Bax低于基因敲除方剂组(P<0.05),方剂组Bcl-2高于基因敲除方剂组(P<0.05)。
5.免疫组化检测Caspase-3、Bax在模型组表达高于假手术组。方剂组Caspase-3、Bax低于模型组(P<0.05),Bcl-2高于模型组(P<0.05)。方剂组C a s p a s e-3、Bax蛋白表达低于基因敲除方剂组(P<0.05), Bcl-2高于基因敲除方剂组(P<0.05)。D A B显色,假手术组细胞着色以蓝色为主,模型组和方剂组凋亡细胞着色以黄色为主。方剂组细胞染色明显变浅。
结论:
1.破血化瘀、填精补髓中药汤剂能够有效降低脑出血后脑水肿程度,减轻血肿周围损伤脑组织的炎症反应,改善神经功能缺损程度;
2.破血化瘀、填精补髓中药汤剂抑制脑出血后损伤是通过降低细胞凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达,以及提高抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达来实现的;
3.破血化瘀、填精补髓中药汤剂可以通过调节Nrf2减轻脑出血继发损伤。
本研究以小鼠脑出血模型为研究对象,采用神经功能评分、脑含水量检测、HE染色、Western blot检测、免疫组化等方法,研究破血化瘀、填精补髓中药汤剂是否通过调节Nrf2改善脑出血小鼠神经损伤程度,抑制细胞凋亡。
方法:
将正常野生型小鼠和Nrf2基因敲除(Nrf2-/-)小鼠各78只,共156只,分别随机分成假手术组、模型组和方剂组三个组别,每组26只。参考Rynkowski造模方法,采集小鼠尾动脉血注射进鼠脑,制备脑出血模型。造模成功后,对各组模型进行神经行为学评分(Garcia),评价神经功能缺损情况,利用干湿重法测量脑含水量,用HE染色法观察小鼠脑组织病理形态变化,从而研究破血化瘀、填精补髓中药汤剂的干预效果。采用Western blot、免疫组化法检测小鼠脑组织Caspase-3、Bax、Bcl-2表达变化,探讨破血化瘀、填精补髓中药汤剂对小鼠脑组织细胞凋亡的影响。
结果:
1.方剂组小鼠Garcia神经行为学评分高于模型组(P<0.05),野生组与基因敲除组比较,存在显著差异(P<0.05)。
2.模型组小鼠脑含水量较假手术组增加明显(P<0.05),方剂组脑含水量与模型组比较下降明显,野生组与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
3.模型组与方剂组HE染色均显示脑组织病理变化明显,但方剂组的脑组织破坏较模型组小鼠轻,野生组与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
4. Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达,模型组和方剂组Caspase-3、Bax表达高于假手术组(P<0.01),Bcl-2表达低于假手术组;方剂组Caspase-3、Bax低于模型组(P<0.05), Bcl-2高于模型组(P<0.05)。方剂组与基因敲除方剂组相比, Caspase-3无明显差异,Bcl-2、Bax具有明显差异(P<0.05)。方剂组Caspase-3、Bax低于基因敲除方剂组(P<0.05),方剂组Bcl-2高于基因敲除方剂组(P<0.05)。
5.免疫组化检测Caspase-3、Bax在模型组表达高于假手术组。方剂组Caspase-3、Bax低于模型组(P<0.05),Bcl-2高于模型组(P<0.05)。方剂组C a s p a s e-3、Bax蛋白表达低于基因敲除方剂组(P<0.05), Bcl-2高于基因敲除方剂组(P<0.05)。D A B显色,假手术组细胞着色以蓝色为主,模型组和方剂组凋亡细胞着色以黄色为主。方剂组细胞染色明显变浅。
结论:
1.破血化瘀、填精补髓中药汤剂能够有效降低脑出血后脑水肿程度,减轻血肿周围损伤脑组织的炎症反应,改善神经功能缺损程度;
2.破血化瘀、填精补髓中药汤剂抑制脑出血后损伤是通过降低细胞凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达,以及提高抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达来实现的;
3.破血化瘀、填精补髓中药汤剂可以通过调节Nrf2减轻脑出血继发损伤。