【摘 要】
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目的:研究曲妥珠单抗对HER2过表达乳腺癌细胞Notch-1信号通路的影响及在HER2过表达乳腺癌细胞中Notch-1与HER2蛋白的关系,认识Notch-1信号通路在乳腺癌细胞形成曲妥珠单抗耐
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目的:研究曲妥珠单抗对HER2过表达乳腺癌细胞Notch-1信号通路的影响及在HER2过表达乳腺癌细胞中Notch-1与HER2蛋白的关系,认识Notch-1信号通路在乳腺癌细胞形成曲妥珠单抗耐药中的意义。方法:以人HER2过表达乳腺癌细胞SK-BR3和非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,采用台盼蓝拒染法及细胞计数法检测两细胞株生长曲线,免疫细胞化学法及Western-blot法分别检测细胞中Notch-1和Notch-1活性分子( NICD-1)的表达。应用曲妥珠单抗处理SK-BR3细胞,Western-blot法检测细胞中NICD-1和HER2的蛋白表达;RT-PCR检测Notch-1靶基因HES-1(hairy/enhancer of split) mRNA的表达。采用免疫荧光双标法和免疫共沉淀法检测SK-BR3细胞中Notch-1和HER2蛋白的关系。结果:免疫细胞化学法显示Notch-1蛋白在SK-BR3细胞株和MDA-MB-231细胞株中均有表达,但其核定位水平在SK-BR3中明显低于MDA-MB-231细胞。Western-blot法结果显示NICD-1的蛋白表达水平在HER2过表达细胞中明显低于HER2非过表达细胞(P<0.01)。应用曲妥珠单抗处理SK-BR3细胞后,细胞内NICD-1蛋白表达及HES-1 mRNA表达显著增高(P <0.01);HER2蛋白表达在处理前后未发生明显变化(P>0.05)。免疫荧光双标法及免疫共沉淀法结果显示在SK-BR3细胞中Notch-1与HER2蛋白之间存在共定位和相互结合的关系。结论:在HER2过表达乳腺癌细胞中,HER2可能通过与Notch-1结合,负性调控Notch-1;曲妥珠单抗可恢复Notch-1的活性而活化Notch-1信号通路,这可能与乳腺癌细胞形成曲妥珠单抗耐药有关
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