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目的:①对急性白血病患者中WT1基因第7、8、9、10外显子区域点突变的发生情况进行检测;②应用基于聚合酶链反应(PCR)技术的实验方法研究部分血液系统肿瘤细胞系中WT1基因启动子区域CpG岛的DNA甲基化水平,及其与WT1基因表达的相互关系。初步探讨血液系统肿瘤中WT1基因功能异常的机制。 方法:①应用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测了68例初诊的急性白血病患者(其中AML52例,ALL16例)及100例健康对照者中WT1基因第7、8、9、10外显子区域点突变的发生情况,并对其中发现异常的标本进行PCR产物直接测序加以验证;②采用RT-PCR技术及甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)技术检测8226、HL-60、Jurkat、K562、KG-1、NB4、SHI-1、Raji、U266及U937等血液系统肿瘤细胞系中WT1基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态:③以5-杂氮脱氧胞嘧啶(5-aza-CdR)对实验中发现存在基因启动子区域DNA高甲基化且WT1基因表达水平较低的U937细胞系进行去甲基化处理后,观察WT1基因表达在mRNA和蛋白水平的改变。 结果:①通过PCR-SSCP检测及PCR产物直接测序,实验发现68例初诊的急性白血病患者WT1基因第8、10外显子区域未发生基因突变;在第7外显子区域发现有26.5%(68例中有18例)的患者存在基因的多态性改变,即在其第9位碱基部位由G替代了A;仅有1例伴有染色体异常的AML-M5b患者在WT1基因第9外显子的第61位碱基部位出现了点突变,由原来的A变为G,其编码的蛋白则由赖氨酸变为谷氨酸。同时对100例健康对照者的检测显示除了在第7外显子区域存在21%(100例中有21例)与前相同的基因多态性改变外,第8、9、10外显子均未发现基因突变。②RT-PCR检测WT1基因mRNA表达发现HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中WT1表达水平高,而8226、Jurkat、Raji、U266和U937细胞系其表达水平则极低;同时在MSP中发现WT1表达水平低的8226、Jurkat、Raji、U266和U937这5个细胞系存在WT1基因启动子区域DNA高甲基化,而在HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中无该部位的DNA甲基化。③经去甲基化处理