水貂肠炎细小病毒(Mink enteritis virus, MEV)属于细小病毒科,细小病毒属,为猫泛白细胞减少症病毒亚群。病毒基因组为单股、负链DNA病毒,自然条件下,病毒引起水貂的病毒性肠炎,以剧烈腹泻为临床特征,幼龄水貂具有较强易感性。目前,MEV引起的水貂病毒性肠炎仍流行严重,阻碍毛皮动物养殖业的发展,特别是给水貂养殖业带来巨大的经济损失。细小病毒NS1蛋白在病毒的复制和转录过程中具有重要作用。通过分离水貂肠炎细小病毒、犬细小病毒毒株,PCR扩增其非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2全基因编码序列,并同GenBank核酸数据库中的其他细小病毒进行序列比对,归纳总结细小病毒间非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2间的氨基酸差异位点,并对细小病毒NS1蛋白的磷酸化位点进行预测,构建遗传发育进化树,分析水貂肠炎细小病毒同其他细小病毒之间重要氨基酸位点的差异及其遗传进化关系。水貂肠炎细小病毒氨基酸遗传变异规律的分析,对深入了解病毒的遗传变异情况、变异规律、病毒的跨种间传播机制以及更好的预防和控制水貂肠炎细小病毒病具有重要的意义。PCR扩增水貂肠炎细小病毒MEVB株NS1蛋白全基因序列,利用Bac to Bac蛋白表达系统,获得表达NS1蛋白的重组杆状病毒,进一步表达纯化获得MEV的非结构蛋白NS1。经PCR鉴定转染成功后,采用间接免疫荧光、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blot鉴定证实了重组蛋白的表达且重组NS1蛋白具有良好的抗原特异性。对表达纯化的NS1蛋白进行生物学特性分析发现,其等电点和空间构象均与自然条件下病毒感染表达的NS1蛋白相似。利用表达纯化的NS1蛋白做为包被抗原,间接ELISA方法检测MEV病毒免疫小鼠后NS1蛋白抗体水平,并与MEV抗体水平对比。研究发现,MEV病毒感染过程中,NS1蛋白抗体检测OD值在第4天开始升高,第8天之后开始下降并持续至感染后12 d;而MEV抗体检测在12 d后开始下降;而灭活病毒免疫小鼠后抗体检测发现,免疫动物体内几乎检测不到针对NS1蛋白的抗体。灭活疫苗免疫水貂71份血清样本NS1蛋白抗体检测发现,免疫水貂体内具有MEV抗体,但并无NS1蛋白抗体。表达纯化的NS1蛋白为建立鉴别诊断病毒感染与疫苗免疫动物的方法提供物质基础,同时监测非结构蛋白和病毒抗体水平为防控水貂病毒性肠炎提供科学依据。