外源性免疫细胞干预人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面修复机制的初步研究

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目的:(1)创建人妊娠中期胎儿皮肤裸鼠移植模型及相应深Ⅱ°烫伤创面修复模型,并观察其愈合过程。(2)观察并比较外源性免疫细胞干预下人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面的愈合过程的变化。(3)结合两种创面愈合过程中MMP-9和TIMP-1的表达变化规律探讨妊娠中期人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面的愈合机制及外源性免疫细胞干预人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面的作用机制。方法:将妊娠中期人胎儿皮肤埋植于裸鼠背部皮瓣下方。温养2周后,利用灭菌的恒温电烫仪(烫头温度为80℃)接触移植成活的人胎儿皮肤,持续5秒钟,以此创建人胎儿皮肤深Ⅱ°°烫伤创面,而后在部分创面下注射健康成人外周血单个核细胞(hPBMCs),观察并比较人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面及hPBMCs干预下人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面的愈合过程。采用免疫组织化学染色法观察并比较两种创面愈合过程中MMP-9和TIMP-1的表达规律。结果:(1)人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面修复完成时间大约为2周。在修复过程早期无明显急性炎症反应,修复细胞在烫伤后第7天开始大量增殖迁移,烫伤后第10天可见增殖的残存附件上皮细胞已迁移至创缘,烫伤后第14天可见上皮化已完成,并且无瘢痕组织形成;hPBMCs干预下人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面在烫伤后3周仍未完成修复过程,在修复过程早期即可见炎性细胞向创面浸润,烫伤后第7天可见创面大量炎性细胞聚集,烫伤后第14天创周炎症反应减弱,创面内增殖的Fb密集,新生胶原排列杂乱,残存附件上皮细胞已向创缘迁移。烫伤后第21天创面仍未完成上皮化修复过程,并且原缺损部位可见明显瘢痕组织形成。(2)人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤后第3天MMP-9和TIMP-1均保持着低阳性水平表达。烫伤后第7天MMP-9在残存皮肤附件上皮细胞胞浆中表达水平升高并持续至烫伤后第10天,而后开始降低直至烫伤后第14天创面修复完成。TIMP-1表达与MMP-9不同,阳性颗粒在烫伤后第7天才开始出现,并一直升高,直至创面修复完成。在烫伤后第7天,阳性颗粒主要表达于残存皮肤附件周围Fb中。烫伤后第10天,在创周的Fb胞浆中TIMP-1开始出现广泛阳性表达。烫伤后14天,TIMP-1在增殖的皮肤附件上皮细胞及新生基底膜周围Fb胞浆中均可见广泛大量阳性表达;hPBMCs干预下烫伤后第3天MMP-9主要表达于烫伤创面皮下脂肪层,创面亦均出现阳性表达。烫伤后第7天皮下脂肪层中阳性表达量降低,创周表达量达到峰值,随后开始逐渐降低。残存皮肤附件上皮细胞胞浆中阳性蛋白表达量从烫伤后第7天开始出现且持续升高直至试验观察结束。TIMP-1表达规律与之相差较大,阳性水平从烫伤后第3天起即在创面有散在表达。烫伤后第7天,TIMP-1表达出现峰值,广泛表达在新生毛细血管内皮细胞、创面及创缘中增殖的Fb胞浆中,而后表达水平逐渐降低,直至消失。结论:妊娠中期人胎儿皮肤深Ⅱ °烫伤创面在宫外环境下可实现无瘢痕愈合。而在hPBMCs干预下,无瘢痕愈合所依赖的低炎症反应环境被破坏,MMP-9及TIMP-1的动态平衡被打破,创伤修复模式转为炎症性瘢痕愈合。
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