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背景与目的:细菌黏附与生物膜的积聚是种植体周围炎的始动因素之一,细菌所产生的毒素直接刺激种植体周围的健康组织,引发炎症反应,最终导致种植体周围发生黏膜红肿,附着丧失,骨质吸收等一系列改变。而在此过程中,巨噬细胞因受到外界刺激可产生一系列相关炎症因子如TNF-α、IL-6、IL-1β等,主要参与杀灭病原微生物,但同时也造成结缔组织和骨组织的破坏。甘氨酸曾被学者发现具有抗炎和免疫调节的作用,因此,本实验的目的是探究甘氨酸是否可以调节巨噬细胞M1型炎症因子的产生和分泌,从而为抑制种植体周围炎的发展提供理论基础。方法:1、培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,实验组加入不同浓度(4、8、16、32、64、128 mmol/L)的甘氨酸,对照组加入等量H-DMEM培养基。在24h、48h、72h采用CCK-8法检测不同浓度甘氨酸对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖活性的影响,以筛选出甘氨酸对巨噬细胞的安全浓度,从而进行后续实验。2、实验分组:阴性对照组为H-DMEM培养基培养小鼠巨噬细胞RAW264.7 48h,刺激组和加药组分别为H-DMEM培养基和安全浓度下的甘氨酸预处理RAW264.7 24h,再加入牙龈卟啉单胞菌内毒素刺激24h,光镜观察每组细胞生长状态及形态改变。3、实验分组同上,在各组培养48h后收集细胞,Quantitative Real-time PCR技术检测各组巨噬细胞促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β的基因表达量。4、实验分组同上,在各组培养48h后收集细胞上清液,用ELISA技术检测各组巨噬细胞促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白表达量。结果:1、CCK-8检测法显示在72h时,≥32mmol/L的甘氨酸组抑制了细胞增殖,而4、8、16mmol/L的甘氨酸对细胞增殖的影响与对照组无明显差异,作为后续实验的加药浓度。2、光镜下观察到巨噬细胞在受到牙龈卟啉单胞菌内毒素刺激后,细胞形态发生改变,而安全浓度甘氨酸预处理的巨噬细胞形态改变较刺激组小。3、q RT-PCR结果显示,刺激组TNF-α、IL-6、IL-1β基因表达水平较阴性对照组高(P<0.05);加药组(4、8、16 mmol/L甘氨酸)的TNF-α、IL-6、IL-1β基因表达水平较刺激组低(P<0.05),16mmol/L的甘氨酸降低基因表达水平的程度最明显(P<0.05)。4、ELISA结果显示,刺激组TNF-α、IL-6蛋白表达水平较阴性对照组高(P<0.05);加药组(4、8、16 mmol/L甘氨酸)组的TNF-α、IL-6蛋白表达水平较刺激组低(P<0.05),16mmol/L甘氨酸降低蛋白表达水平的程度最明显(P<0.05),IL-1β蛋白的分泌各组均未探及。结论:1、16mmol/L浓度以下的甘氨酸为安全浓度,对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞增殖无影响,而32mmol/L以上浓度的甘氨酸对细胞增殖表现明显的抑制作用。2、甘氨酸(≤16mmol/L)在一定程度上抑制牙龈卟啉单胞菌LPS刺激下巨噬细胞RAW264.7促炎因子的分泌。