研究背景乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,乳腺癌的侵袭转移是影响患者疗效和预后并导致死亡的重要因素。肿瘤的侵袭转移是一个多步骤的、复杂的、有序的过程,具有器官选择性。与造血干细胞及淋巴细胞“归巢”类似,趋化因子在肿瘤嗜器官转移中起了重要作用。与乳腺癌复发转移密切相关的CC类趋化因子5(CCL5)被认为与乳腺癌严重程度呈正相关。前期研究表明CC类趋化因子5产生的主要机制可能是内质网应激能够刺激乳腺癌细胞非磷酸化的信号传导与转录活化因子-3(STAT3)的表达增加,从而促进CC类趋化因子5分泌。但是目前对于肿瘤组织中非磷酸化STAT3的过度表达的机制缺乏足够的了解。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)在乳腺癌中也存在高表达,而蛋白酪氨酸磷酸酶1B主要作用之一就是促使磷酸化的酪氨酸去磷酸化,而激活的STAT3磷酸化位点为Tyr705,有可能成为PTP1B的作用底物。因此推测乳腺癌组织中可能存在内质网应激激活的PTP1B/STAT3信号通路。本文将探讨PTP1B/STAT3在CC类趋化因子5产生通路上所起作用。方法1.分别采用Western-blot和RT-PCR方法检测乳腺癌组织及癌旁组织中内质网应激的标志物CHOP的表达水平；分别运用0mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L内质网应激的激动剂(Funicamycin)处理MCF-7细胞,并采用Western-blot检测细胞中CHOP的表达变化；用’Funicamycin分别处理MCF-7细胞0h、6h、12h、1 8h、24h,采用Western-blot检测细胞中CHOP的表达变化；分别用内质网应激的激动剂(Tunicamycin)和抑制剂(4-PBA)对MCF-7细胞进行处理,采用Western-blot检测MCF-7细胞中CHOP、CCL5的表达变化,同时MTT试验检测MCF-7细胞增殖能力的变化。2.分别运用Western blot和RT-PCR检测人乳腺癌标本中PTP1B、U-STAT3和CCL5的表达情况；检测人乳腺癌组织、内质网应激下MCF-7细胞及其相应对照组PTP1B酶活性；使用Tunicamycin和PTP1B抑制剂(CinnGEL 2Me)处理MCF-7细胞,运用Western blot检测MCF-7细胞中PTP1B、U-STAT3与CCL5的变化,并通过MTT试验检测MCF-7细胞增殖能力的变化；采用基因沉默的方法下调PTP1B的表达,通过Western blot检测PTP1B下调后P-STAT3、U-STAT3以及CCL5的表达。结果1.无论是蛋白含量还是mRNA的含量上,内质网应激的标志物CHOP在乳腺癌组织中表达明显高于癌旁组织。当使用内质网应激的激动剂(Tunicamycin)来处理MCF-7细胞时,MCF-7细胞CHOP的表达都会显著上升,并且随着剂量的增加表达呈上升趋势,且CHOP的表达与Tunicamycin处理时间呈正相关性。本研究发现单独运用Tunicamycin时MCF-7细胞内质网应激强度加强,并且CCL5的表达也随之出现升高,而内质网应激抑制剂(4-PBA)处理细胞后发现内质网应激被抑制,而CCL5的表达也随之被抑制。Tunicamycin可以增加细胞的增殖能力；而4-PBA可以抑制Tunicamycin所导致的细胞增殖；单独使用4-PBA也将抑制细胞增殖能力。2.人乳腺癌组织中PTP1B的表达和活性远高于癌旁组织,内质网应激增强的情况下MCF-7细胞的PTP1B活性和数量也上升,而U-STAT3、CCL5也随之增长。当使用PTP1B抑制剂(CinnGEL 2Me)时U-STAT3、CCL5出现下降。使用基因沉默的方式下调PTP1B表达,U-STAT3、CCL5表达亦随之降低,而P-STAT3数量上升。MTT法检测细胞增殖率后发现PTP1B激活时细胞增殖能力提高,而用PTP1B抑制剂后细胞增殖率显著下降。结论乳腺癌组织中存在的内质网应激反应能够激活PTP1B/STAT3信号通路,导致非磷酸化的STAT3表达异常增加；而非磷酸化的STAT3通过与IκB竞争结合非磷酸化的NF-κB,形成新的转录因子,导致CCL5表达增加。内质网应激下,PTP1B/STAT3通路是内质网应激下CCL5高表达的重要通路。