建立多重实时定量PCR（Multiplex Real time quantitative PCR，MRQ-PCR）同时快速检测血中大肠杆菌（E.coli）与白念珠菌（C.albicans）DNA的方法以评估肠屏障损伤可能导致的细菌移位程度及提供针对性用药的建议。　　 在论文第一部分中，选择大肠杆菌β-右旋半乳糖苷酶基因作为检测大肠杆菌的靶基因设计引物和探针，选择白念珠菌ITS2基因来设计引物和探针。采用QIAamp（）DNA Blood Mini Kit试剂盒提取大肠杆菌与白念珠菌基因组DNA；建立25μlTaqMan探针MRQ-PCR反应体系；对18份模拟血标本及65份外科发热患者临床标本进行MRQ-PCR检测。结果引物和探针特异性好。大肠杆菌与白念珠菌标准曲线相关系数分别在0.994～0.999之间和0.994～0.998之间。扩增效率分别为0.894～1.022和0.905～1.028。上机样本检测限分别为13.9拷贝/μl上机检测液和0.8拷贝/μl上机检测液。标准品中大肠杆菌与白念珠菌特异基因平均回收率分别为（101.8±5.69）％和（103.74±4.64）％。本研究对大肠杆菌与白念珠菌检测方法批内变异系数分别为（13.14±10.27）％和（19.18±8.54）％，批间变异系数分别为（14.35±9.34）％和（18.31±10.25）％。仪器对二者检测灵敏度分别为100％和99.69％，特异度分别为100％和94.73％。血标本中大肠杆菌与白念珠菌特异基因平均回收率分别为（111.60±11.06）％和（99.96±6.16）％，回收率的变异系数（CV）分别为（11.02±5.65）％和（8.14±7.29）％。血标本中的检出限为：大肠杆菌基因12455.20拷贝/ml、白念珠菌基因800.32拷贝/ml。　　 论文第二部分，对31例外科发热患者的74份血标本进行了MRQ-PCR检测。39个标本检测到大肠杆菌DNA，阳性率为52.7％，74份血标本只有一份标本检测到白念珠菌，阳性率为1.35％。74份标本血培养结果大肠杆菌阳性标本只有2份而白念珠菌均为阴性，阳性率分别为2.7％与0。显示多重实时定量PCR可用于同时定量检测全血标本中大肠杆菌与白念株菌DNA的含量。　　 论文第三部分研究中采集了本院外科发热患者体温、心率和白细胞计数等资料，同多重实时定量PCR检测外科发热患者静脉血中细菌DNA进行了相关性分析，结果显示标本大肠杆菌DNA含量同体温、心率之间均呈显著相关关系（P=0.000），但它们之间的相关密切程度均为中等（r值分别为0.511和0.649）。但体温和心率容易受到各种因素影响，故以此来判断肠道菌血症的严重程度可能并不实用。大肠杆菌DNA含量与白细胞计数、中性粒细胞和淋巴细胞百分比之间相关关系不显著（P值分别为0.186、0.824及0.603，r值分别为0.155、0.026及-0.061）。　　 综合研究结果显示，多重实时定量PCR可以同时快速、灵敏、特异地定量检测血标本中大肠杆菌与白念珠菌DNA，重复性好、节省血标本用量及检测成本、总检测时间缩短，在临床全血标本真菌与细菌的快速鉴别检测、抗微生物药物的针对性应用及疗效评估、肠屏障损伤后果及疗效的评估中有较实用的推广前景。