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化合物知母皂苷B-II是从中药材知母中提取的含有两个糖链的水溶性甾体皂苷类化合物。前期药理学研究表明此化合物具有显著改善多种拟痴呆模型动物的学习记忆功能的作用,在抗老年痴呆方面具有良好前景。为阐明知母皂苷B-II药代动力学特性,本研究考察了知母皂苷B-II在大鼠体内药代动力学行为,其中包括不同大鼠品系的差异,饱食和禁食的差异等;观察了知母皂苷B-II在大鼠体内组织分布、代谢和排泄的情况,以求为进一步临床前和临床研究提供科学依据。第一部分:大鼠血浆中知母皂苷B-II定量分析方法建立和确证根据化合物结构特点和理化性质,采用沉淀蛋白结合液质联用技术建立了一种快速、专属、灵敏和准确的大鼠血浆中知母皂苷B-II的液质联用检测方法(HPLC-MS/MS)。经过质谱条件和液相条件优化,最终确定了采用乙腈沉淀蛋白后,以重楼皂苷I为内标物﹙Internal Standard,IS﹚,色谱柱为GRACE公司Alltima HP C18柱(2.1×50 mm,5μm)。分析流动相为乙腈:1 mmol/L乙酸铵溶液(30 :70,v :v),流速0.2 ml/min,柱温:室温。检测方式为负离子多反应监测(MRM),采用气动辅助电喷雾离子化(ESI)方式电离。方法学验证参考FDA关于分析方法验证指导原则和SFDA对用于药代动力学研究方法学的要求,考察了精密度和准确度、基质效应、回收率、稀释线性和稳定性(4°C进样盘中12 h的稳定性、反复冻融和长期稳定性)等参数。结果表明:知母皂苷B-II在大鼠血浆中的标准曲线线性范围为5-2000 ng/mL,最低定量下限(LLOQ)为5 ng/mL。质控样品的高、中、低三种浓度日内和日间精密度均<10.3 %,准确度为-3.7%-7.5 %。知母皂苷B-II在大鼠血浆中不存在明显的基质效应,乙腈沉淀蛋白方法的知母皂苷B- II提取回收率高、中、低浓度分别为91 %,112 %,107 %。方法学验证的结果表明采用此方法测定的药物浓度准确、可靠,其测定误差满足药代动力学研究方法学的要求限度。第二部分:SD大鼠单次ig不同剂量知母皂苷B-II后药代动力学性质研究了单次灌胃给予不同剂量(20,40,80 mg/kg)知母皂苷B-II后血浆中药物浓度-时间变化。结果表明知母皂苷B-II在大鼠体内的血药浓度个体差异大,个体达峰时间(Tmax)及峰浓度(Cmax)变异很大,提示药物的吸收很不规则。各组内多数大鼠血药浓度于给药后5 ~ 30 min达峰,提示知母皂苷B-II灌胃后迅速吸收,胃及消化道上段可能是其有效吸收部位。各剂量组AUC(0-t)比值(1:1.4:2.6)与剂量之比(1:2:4)不呈线性。随剂量增高,药时曲线双峰现象呈明显趋势,导致双峰现象的原因可能为肠肝循环和/或胃肠消化道的不均一吸收。SD大鼠iv 20 mg/kg知母皂苷B-II后,血药浓度于给药后的第一个观测点5 min达峰,峰浓度为185833.3 ng/mL,随后血药浓度随时间显著下降,给药1.5 h后绝大多数血药浓度已降至峰浓度的1/100或以下,以20 mg·kg-1 iv给药组的归一化AUC(0-t)为分母,大鼠80 mg/kg ig给药组的绝对生物利用度仅为0.11±0.09 %。第三部分:Wistar大鼠单次ig不同剂量知母皂苷B-II后药代动力学性质由于知母皂苷B-II在SD大鼠体内药代动力学行为表现个体差异大,因此选择另一品系啮齿类动物Wistar大鼠研究知母皂苷B-II在其体内药代动力学性质。结果表明知母皂苷B-II在Wistar大鼠和SD大鼠体内药代动力学行为相似,均表现为个体差异大,吸收不规则,生物利用度低的特点。第四部分:比较SD大鼠在饱食和禁食两种状态下药代动力学行为差异由于在禁食条件下,知母皂苷B-II在大鼠体内口服表现吸收不规则、个体差异大,生物利用度低等特点,同时大量药理研究表明食物对药物的吸收产生促进、抑制甚至产生严重的不良反应。为评价食物对知母皂苷B-II PK的影响,本部分探讨了禁食和饱食状态下知母皂苷B-II在SD大鼠体内的药动学性质。结果表明大鼠在饱食和禁食两种状态下均观察到双峰现象,与禁食口服给药后的药时曲线相似。饱食组第一吸收峰显著高于空腹组,且由于食物的存在使吸收更加不规则。相同剂量相同给药途径下,大鼠的饱食组和空腹组AUC(0-t)分别为221.05±157.75和201.81±178.70 ng·h/mL,两者无统计意义差别,但均值上饱食组较禁食组增加约10%,结果表明食糜的存在使知母皂苷B-II的吸收增加,但也会使药物吸收更加不规律。第五部分:研究了SD大鼠灌胃给予知母皂苷B-II后组织分布,胆汁和粪尿排泄大鼠灌胃给予40mg/kg知母皂苷B-II后,选择给药后30 min,2 hr和8 hr (涵盖吸收相、分布相和消除相)三个时间点分别处死大鼠,取大脑、小脑和脑干、心、肝、脾、肺、肾、胃、胃内容、十二指肠及其肠内容、直肠肠内粪、脑、骨骼肌、脂肪、生殖腺和体液等19种组织或器官,测定知母皂苷B-II在这些组织或器官的浓度。排泄研究观察了大鼠给予80 mg/kg知母皂苷B-II后至96 h的粪尿排泄情况及给药后至24 h的胆汁排泄情况。结果表明:灌胃40 mg/kg知母皂苷B-II水溶液后,其在组织中的暴露水平由低到高依次为:小脑、肾、脑干、大脑、脾、肺、心脏、生殖腺、肌肉、肝、血浆、脂肪、肠内粪、肠内容、尿、小肠、胃和胃内容,提示化合物知母皂苷B-II主要分布在消化道(如:胃、肠和消化道内容物)。药物在大脑、小脑和脑干中也有少量分布,且没有时相变化。在大多数组织中,知母皂苷B-II浓度在0.5 h达到高峰,提示药物在组织中有很快的分布速度。灌胃80 mg/kg知母皂苷B-II水溶液后, 24小时内药物经胆汁排泄累积率是2.54±1.59 %,96小时内在粪和尿中知母皂苷B-II累积排泄率是0.0188±0.0090 %,96小时内在尿和粪累积排泄率分别是0.0144±0.0082 %,其中粪只在6-12 h检测到微量原形物,在24 h后基本检测不到原形。结合分布实验验结果,推测知母皂苷B-II物主要以代谢物形式排泄。总结以上研究结果,知母皂苷B-II在啮齿类动物SD大鼠或Wistar大鼠中均表现血药浓度个体差异大,生物利用度低。经口服给药后胃内食物有助于知母皂苷B-II的吸收,但将导致其吸收更不规则。口服知母皂苷B-II后其主要分布于消化道(如:胃、肠和消化道内容物)中,少量广泛分布于全身其它组织。药物在各组织中的分布速度较快,在大脑、小脑和脑干中有少量分布且无时相变化。