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目的:通过体外实验探讨靶向干扰B7-H4分子前后C3H10T1/2(以下简称C3H10)细胞对T细胞亚群的影响,并观察C3H10细胞的生存、增殖、迁移等生物学行为的改变;进一步通过体内实验探讨B7-H4在C3H10细胞移植治疗小鼠EAE模型中体内效应的机制。方法:1、用慢病毒将B7-H4靶向sh RNA转染至C3H10细胞构建小鼠B7-H4靶向sh RNA稳定转染的C3H10细胞(C3H10-B7-H4细胞),应用Ki-67检测靶向干扰B7-H4分子前后C3H10细胞增殖情况;用细胞计数法绘制生长曲线的变化,观察细胞增殖能力的改变;应用流式细胞仪检测B7-H4对C3H10细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达的影响,用划痕实验观察C3H10细胞迁移能力的改变;将转染前后的细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共同培养,用ELISA检测其对T细胞亚群的影响。2、利用MOG35-55和完全弗氏佐剂制备小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,将n=50只小鼠分为正常对照组(n=10)、EAE组(n=10)、C3H10组(移植C3H10细胞)(n=10)、C3H10-NC组(移植sh RNA对照质粒转染的C3H10细胞)(n=10)、C3H10-B7-H4组(移植C3H10-B7-H4细胞)(n=10),之后每日对各组小鼠进行神经功能缺损评分,在免疫后第6天,按1×106/只细胞数量移植入分小鼠体内;在小鼠发病的急性期及慢性加重期,用流式细胞仪检测各组小鼠外周血细胞上B7-H4的表达变化;用ELISA法检测外周血可溶性B7-H4(s B7-H4)、IL-2、IL-17、IFN-γ、IL-4的表达变化;收集小鼠脾脏组织,流式细胞仪检测各组脾脏细胞上B7-H4的表达变化;结合神经功能评分观察不同干预方式对EAE损伤组织结构和功能的影响,明确B7-H4分子在C3H10移植治疗EAE体内效应的机制。结果:1、B7-H4靶向sh RNA转染C3H10可抑制其B7-H4的表达;下调表达B7-H4后C3H10细胞内的Ki-67表达减少,达到对数生长期的时间延长,增殖能力减弱;下调表达B7-H4后C3H10细胞表面趋化因子受体CXCR4表达减少,划痕愈合减慢,迁移能力减弱;下调表达B7-H4的C3H10细胞对淋巴细胞的分泌B7-H4、IL-2、IL-17、IL-4、IFN-γ的抑制作用减弱。2、正常对照组小鼠未见发病,EAE组小鼠发病时间较其他组早,并且神经功能评分高;C3H10-B7-H4组发病时间及神经功能评分均介于C3H10组及EAE组之间;EAE组小鼠外周血及脾脏中CD19+B7-H4+B细胞数量均较正常组增加,C3H10-B7-H4组介于C3H10组及EAE组之间;EAE组小鼠血浆中可溶性B7-H4表达较正常组低,IL-4在这五组小鼠体内表达的差异不大;IL-2、IL-17、IFN-γ的表达在EAE组小鼠较正常组小鼠明显升高,其中C3H10细胞治疗后可以抑制IL-2、IL-17的表达,下调表达B7-H4的C3H10细胞治疗后对这些分子表达的抑制作用减弱。结论:1、B7-H4分子参与了C3H10细胞对T细胞增殖、活化的抑制过程,这一过程可能是通过对可溶性分子B7-H4、IL-2、IL-17、IFN-γ等相关细胞因子表达的影响起作用。2、B7-H4分子在C3H10移植治疗小鼠EAE模型的病程中发挥了重要作用,并且可能是通过影响C3H10细胞的存活、增殖、迁移等生物学行为发挥作用。3、B7-H4介导了C3H10移植治疗EAE的免疫调节,这一过程可能是通过对IL-2、IL-17等相关细胞因子表达的影响,即调节Th1、Th17等炎性效应性T细胞间接发挥作用。