【摘 要】
：
目的:探究miR-200b-5p对骨肉瘤增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及其可能的机制。方法:（1）以q RT-PCR检测人种属的软骨细胞系（C28）、骨肉瘤细胞系（Saos2、U2OS）以及收集的本院临床骨肉瘤患者骨肉瘤组织和正常骨组织中的miR-200b-5p、c-Myc、c-Met的RNA表达量,以Western Blot检测C28、Saos2、U2OS细胞中c-Myc、c-Met的蛋白表达量。
【基金项目】
：
国家自然科学基金“BMI1和KLF4双信号通络阻滞在骨肉瘤干细胞的自我更显和肺转移中的作用及机制研究（编号:81772867）”； 山西省自然科学基金青年项目“新抑癌基因Necdin与癌基因c-Myc在抑制骨肉瘤增殖和肺转移中的作用及机制研究（20210302124419）”；
论文部分内容阅读
目的:探究miR-200b-5p对骨肉瘤增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及其可能的机制。方法:（1）以q RT-PCR检测人种属的软骨细胞系（C28）、骨肉瘤细胞系（Saos2、U2OS）以及收集的本院临床骨肉瘤患者骨肉瘤组织和正常骨组织中的miR-200b-5p、c-Myc、c-Met的RNA表达量,以Western Blot检测C28、Saos2、U2OS细胞中c-Myc、c-Met的蛋白表达量。（2）用miR-200b-5p-mimic慢病毒感染人骨肉瘤Saos2细胞,构建miR-200b-5p过表达的细胞（miR-200b-5p mimic）作为实验组,用不携带miR-135a-5p mimic的空载病毒感染Saos2细胞,构建对应阴性细胞（Control）作为对照组,通过q RT-PCR检测转染效率及相应下游靶基因m RNA变化。通过CCK-8法、集落形成实验来检测miR-200b-5p对骨肉瘤细胞增殖的影响,通过划痕实验和Transwell实验检测miR-200b-5p对骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响,通过细胞流式术检测miR-200b-5p对骨肉瘤细胞抗凋亡能力的改变。通过Western Blot实验分析miR-200b-5p对靶基因c-Myc、c-Met,血管生成相关蛋白VEGF、MMP2、MMP9及PI3K-AKT-m TOR、NF-κB通路蛋白的影响。（3）以control组和miR-200b-5p-mimic组细胞来构建骨肉瘤裸鼠异体移植瘤模型,通过观察实验组与对照组异体移植瘤的生长情况来探究miR-200b-5p在体内对骨肉瘤生长的作用;异体移植瘤裸鼠的肺组织在HE染色后观察骨肉瘤肺转移灶数目和大小,探究miR-200b-5p在异体移植瘤模型中对骨肉瘤肺转移的作用;通过免疫组化检测miR-200b-5p对异体移植瘤中血管生成相关指标VEGF、MMP2及MMP9表达的作用。结果:（1）相比于人软骨细胞系（C28）,人骨肉瘤细胞系（Saos2,U2OS）中miR-200b-5p的表达均降低,c-Myc与c-Met表达升高。临床获取的骨肉瘤组织相比于正常骨组织其miR-200b-5p表达降低,c-Myc与c-Met表达升高。West Blot结果显示人骨肉瘤细胞系（Saos2,U2OS）中c-Myc、c-Met蛋白相比于人软骨细胞系（C28）表达升高。（2）慢病毒miR-200b-5p mimic与相应对照阴性病毒分别转染Saos2及U2OS细胞后,荧光倒置显微镜下观察到两组细胞中带荧光的细胞数量占比都超过90%,经q RT-PCR验证,miR-200b-5p-mimic组的miR-200b-5p表达量显著高于Control组,其相关下游指标c-Myc、c-Met及血管生成相关指标VEGF、MMP2和MMP9的表达降低。CCK-8实验结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞的增殖曲线低于Control组细胞,集落形成实验结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞形成的集落数及集落大小均低于Control组细胞,表明OS细胞高表达miR-200b-5p后增殖能力减弱。划痕实验结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞迁移距离少于Control组细胞,表明OS细胞高表达miR-200b-5p后迁移能力变弱。Transwell实验结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞穿膜到达下层小室的细胞明显少于Control组细胞,表明OS细胞高表达miR-200b-5p后侵袭能力减弱。细胞流式术检测细胞凋亡结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞凋亡数量相比于Control组明显增加,表明OS细胞高表达miR-200b-5p后抗凋亡能力明显减弱。Western Blot实验结果显示miR-200b-5p-mimic组相比于Control组细胞c-Myc、c-Met蛋白表达减少,PI3K-AKT-m TOR与NF-κB通路蛋白表达降低。（3）在体实验结果表明,相比于Control组,miR-200b-5p-mimic组裸鼠的异体移植瘤生长被抑制。异体移植瘤造模裸鼠的肺组织HE染色结果示miR-200b-5p-mimic组裸鼠肺转移灶的数目少于Control组。裸鼠异体移植瘤的免疫组化结果显示miR-200b-5p-mimic组瘤体的血管生成相关指标VEGF、MMP2及MMP9表达量降低。结论:（1）骨肉瘤细胞系和临床骨肉瘤患者骨肉瘤组织中miR-200b-5p低表达,c-Myc与c-Met异常高表达。（2）在体外过表达miR-200b-5p抑制Saos2细胞的增殖,负向调控其迁移、侵袭和抗凋亡能力;降低血管生成相关指标VEGF、MMP2以及MMP9表达量的同时也抑制HUVEC细胞血管生成;过表达miR-200b-5p在骨肉瘤中负向调节c-Myc、c-Met的表达,同时也作用于PI3K-AKT-m TOR与NF-κB通路。（3）在体内过表达miR-200b-5p可抑制异体移植瘤的生长,减少VEGF、MMP2及MMP9的表达,提示miR-200b-5p可能在骨肉瘤中靶向作用于VEGF、MMP2、MMP9从而影响骨肉瘤的血管生成。
其他文献
目的:CEBPA基因突变是AML中常见的一个亚型,在正常核型中的突变率高且预后较好。越来越多的证据表明,除了特定的起始突变与AML发生相关外,伴随基因突变在疾病的发生发展也有密切作用。因此本研究拟进一步探讨CEBPA突变阳性CN-AML伴不同功能基因突变对患者临床特征及预后的影响。方法:1、CN-AML患者检测34种基因突变发生情况。使用二代高通量测序技术对CN-AML患者初诊时的骨髓或外周血标本
目的:原发性血小板增多症（Essential Thrombocythemia,ET）是骨髓增殖性肿瘤（Myeloproliferative Neoplasms,MPN）中发病率较高的一种类型。JAK2V617F、MPL、CALR基因突变为该疾病的主要致病基因。研究发现CALR突变ET患者与JAK2V617F突变ET患者在巨核系（血小板）增殖作用方面有所差异,提示CALR突变ET患者可能有其他新的机
目的:步态损伤常见于脑小血管病（CSVD）患者。老年人磁共振成像（MRI）显示的白质高信号、腔隙性脑梗死和脑微出血也是典型的CSVD标记物。我们的目的是探讨CSVD患者,单任务行走（STW）和双重任务行走（DTW）条件下的时空步态参数以及双重任务成本（DTC）的差异,并研究步态参数与神经影像学标记物之间的相关性。方法:本研究纳入了2020年9月至2021年9月在中国人民解放军总医院第七医学中心神经
目前我国农村生活污水具有水量小、布局分散、水质波动大等特点，农村生活污水处理设施存在工艺相对单一、自动化程度不高、抗冲击能力弱及运营管理复杂等缺点，急需一种具有运输方便、安装快捷、占地面积小、运营管理简单、出水水质稳定等特点的一体化设备。因此，研究设计了一种缺氧+快速生化反应沉淀（A/RPIR）一体化设备，现场试验证明该设备在设计水质和水量范围内出水水质能够稳定达到DB 32/3462—2020《
目的:本研究旨在探讨外源性Tregs细胞是否以剂量依赖的方式进入小鼠动脉硬化斑块进而稳定粥样硬化斑块并减轻动脉粥样硬化的发生及发展,探讨在动脉粥样硬化中Tregs细胞诱导M1巨噬细胞向M2巨噬细胞极化降低动脉粥样硬化发展的作用研究,为治疗动脉粥样硬化斑块提供一个新的方法以及思路。方法:本次实验一共分为体内实验和体外实验两个部分;1.体外实验:首先获得骨髓来源巨噬细胞M0,通过LPS（100ng/m
针对当前农村生活污水低碳氮比现状和处理难题，研发了拥有自主知识产权的MFBR泥膜共生污水处理工艺，并形成了一套分散式农村生活污水处理一体化设备，该设备集缺氧池、厌氧池、移动床曝气池、固定床曝气池及沉淀池于一体。研究考察了MFBR一体化设备用于处理湖南省某村庄生活污水的性能，结果表明：稳定运行后出水水质均达到《城镇污水处理厂污染物排放标准》（GB 18918—2002）一级A标，运行成本根据处理量在
目的:制定促进生物活性因子/药物穿透致密关节软骨表面结构以到达深层区域并修复软骨损伤的有效递送系统是一个关键且未解决的问题,因此需要开发一种有效的能够应用于软骨细胞和软骨组织的新型多功能递送系统,并验证其携带生物活性物质对软骨组织的治疗效果。方法:在这项研究中,我们制备了m-CQD-HA（即携带寡聚HA的m-CQD）,通过共聚焦荧光显微镜观察、实时无标记细胞分析技术（RTCA）、流式细胞技术、EL
＜正＞当前事业单位发展需要人才，拥有高素质人才，单位才能实现平稳、飞速的发展。在事业单位人才招聘的过程中，人力资源管理人员不仅需要对人员的理论知识掌握程度进行考核，还需要考察他们的综合素质，确保其在步入岗位之后能够快速了解工作内容、熟悉工作流程。公立医院人才招聘含义伴随着事业单位改革，公立医院人才招聘已经从最初的人员招揽转型为人员甄选测评。从定义角度来看这是一个多维度的综合测评，其中包括对应聘人员
目的:探讨intermedin（IMD）是否可以通过减轻氧化应激保护肾小管周围毛细血管（PTC）内皮细胞,防止PTC破坏,稳定PTC数量,从而抑制急性肾损伤（AKI）转变为慢性肾脏病（CKD）。方法:C57BL/6J背景的IMD基因敲除（IMD-KO）的雄性小鼠和同窝野生型（IMD-WT）雄性小鼠,分别分为2组,具体如下:对照组:分离左侧肾蒂后关腹,14d后切除右肾;模型组:分离并夹闭左侧肾蒂21
目的:基于靶向二代测序数据深入探讨TET2基因在成人正常核型原发急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）中的突变特点及其在不同遗传背景下的预后效应。方法:1.病例收集回顾性分析2017年2月至2020年12月在山西医科大学第二医院中心诊治的157例初诊成人正常核型原发AML患者,患者初诊时的临床基本特征数据（年龄Age、性别Sex、红细胞数RBC、白细胞数WBC、血小