目前，以LAK细胞、TIL、CIK、CD3AK等为代表的继承性细胞免疫治疗是肿瘤免疫治疗的主要方法，对肿瘤有一定的疗效，已成功的应用于某些肿瘤临床。这几种方法均属于非主动性的细胞免疫治疗方法。动物实验和临床经验证明，自身的免疫系统虽然不能根除肿瘤，但却可以识别和杀伤具有抗原性的肿瘤细胞。近年的研究表明，机体之所以缺乏强有力的抗肿瘤免疫应答，一个可能的原因是肿瘤细胞的抗原性弱，而且患者抗原提呈细胞的功能低下，使肿瘤抗原不能有效的提呈给淋巴细胞。树突状细胞（dendritic cell，DC）是目前已知的体内抗原提呈功能最强的专职抗原提呈细胞（APC），是免疫反应的启动因子和调节因子，是T、B淋巴细胞的有效刺激因子。所以，以DC为基础的主动特异性肿瘤免疫治疗逐渐成为肿瘤免疫治疗的主要研究方向。将DC体外培养扩增，并用肿瘤抗原致敏，然后回输到体内，也就是说将DC作为一种细胞型免疫性剂用于制备肿瘤疫苗，是其中的一个基本研究思路。高聚金葡素（HAS）是一种超抗原抗癌生物制剂，具有刺激T细胞增殖，增强免疫功能等生物学活性。 第四军医大学硕士学位论文 我们建立了体外培养扩增DC的方法，并将其与超抗原HAS活化的淋 巴细胞结合起来，诱导产生了高效特异性的抗肿瘤免疫应答能力。主要研 究内容有3部分。 1．DC的体外培养和鉴定气 常规分离外周血单个核细胞（PBMC），用含10％小牛血清的RPMI 1640 悬浮，细胞加人6孔扳，贴壁细胞加完全1640培养液，用皿－CSF及IL－ 4联合刺激诱导DC分化，再用TNF－Q和PG巳促进DC成熟。DC培养至第 10天，收集细胞，直接或间接免疫荧光染色后，用流式细胞仪分析。经 此方法培养的细胞，相差显微镜下可看到细胞表面有大量毛刺状突起， CD的阳性率71％，CD83为50％，CD14阳性率低于10％，并高表达HLA－ I、HLA刁1分子和CD45，为典型的DC形态和表型特征。 2．效应细胞的培养及体外细胞毒实验 PBMC中的非贴壁细胞，调浓度至 IX 10‘／ml，加 HAS培养，每 4天 换液 1次，即为 HASL。DC用oC－82细胞粗提抗原致敏。第 10天，将致 敏DC与经或未经HAS刺激的淋巴细胞馄合培养，分别称混合培养细胞为 DC－HASL和DC－L。分别以HASL、DC－HASL和DC－L为效应细胞，以肺癌细 胞A549、GLC－82、大肠癌细胞moser和乳腺癌细胞MCF－7为靶细胞，以 效靶比为 10：l放入 96孔板中。用 MTT实验测定效应细胞对各肿瘤细胞 的杀伤作用。结果，DC－HASL对GLC－82细胞具有高效而特异性的杀伤作 用（杀伤率100％）：对另一肺癌细胞A549细胞的杀伤率也达94．2为对m。SeS 和 MCF－7的杀伤率分别为 73．5％和刀．2％。而 HASL和 DC1对 A549、GLC－82、 moser和MCF－7细胞的杀伤率则分别为48％、63＄、60％、45％和42．l％、46．4％、 39％、25．6％。 3．裸鼠肺癌模型的建立和肿瘤生长抑制实验 裸鼠股部皮下接种 GLC－82细胞 5 XIO’个，随机分为 4组：＊）生理盐 水对照组；mDC－HASL组；卿DC－L组；（4）HASL组。分别于接种瘤的第4， 4 第四军医大学硕士学位论文 一 10，15日向肿瘤局部注射效应细胞，对照组注射生理盐水。至第 20日结 束实验，测量各组肿瘤体积并杀鼠取瘤。肿瘤局部大体观察可见，治疗组 瘤块较小、较光滑、较局限，对照组肿瘤块较大，形状不规则。DC－HASL 治疗组竟有一只裸鼠未见肿瘤块。对照组、DC－HASL治疗组、DC＊组和HASL 组的肿瘤体积分别为298．40t77．58、18．sll4．2、43．15if9．44和70．67 士 70．sl nun’。与对照组相比，三种治疗组肿瘤抑制率分别达 93．8％、85．5％ 和76．3％。 研究结果表明，HAS在体外可维持淋巴细胞的活性并使其获得一定 程度的增殖，而且外周血淋巴细胞经HAS刺激后，具有一定的杀伤肿瘤 的作用。将DC与HASL结合可诱导产生高效特异性的抗肿瘤免疫活性细 胞，为利用同种异体效应细胞进行肿瘤兔疫治疗提供了依据。 本研究首次将DC介导的主动特异性细胞疗法与?