研究背景:西罗莫司是一种大环内酯类抗生素类免疫抑制剂,因肾毒性少、抗增殖、抗肿瘤作用突出的特点,主要用于预防器官移植后的排斥反应及自身免疫性疾病的治疗。目前该药物市售剂型有片剂、胶囊剂、口服液等。目前,尚无其皮肤外用剂型上市。在慢性皮炎湿疹（AD）的治疗中^[1-2],外用钙调磷酸酶抑制剂（TCIs）可代替糖皮质激素使用,为AD的治疗提供一种非激素、局部外用抗炎症药物,可有效减轻皮肤萎缩症状的发生。大环内酯类免疫调节剂,属于钙调磷酸酶抑制剂（TCIs）,目前国内上市的有第二代免疫抑制剂他克莫司软膏和吡美莫司乳膏,西罗莫司属于第三代免疫抑制剂。2006年美国FDA宣布批准吡美莫司乳膏、他克莫司软膏更新说明书,说明书中将加入关于潜在癌症风险的黑框警告,同时还会分发1份患者《用药指南》,以确保使用这2个处方药的患者了解此风险。新的说明书还建议这2个药品作为二线治疗药使用,且不用于2岁以下儿童。临床研究^[3]发现,与服用他克莫司的病人相比,接受西罗莫司治疗的病人发生皮肤鳞状细胞癌的风险减少一半,提高了用药的安全性。针对这种现状,很有必要研究新的制剂,以减少临床用药时的不良反应。西罗莫司生物活性很高,因其难溶性口服生物利用度约为15%^[4],有关西罗莫司皮肤外用剂型的研究未见报道。本研究的目的是以西罗莫司为模型药物,采用乳膏剂和新型固体脂质纳米粒技术,将其制成皮肤外用制剂,通过经皮给药提高皮肤局部药物浓度,更好地发挥局部治疗作用,降低不良反应。研究内容:利用传统乳化法制备西罗莫司乳膏;通过单因素筛选和正交实验,优选出西罗莫司固体脂质纳米粒的最佳处方组成及其制备工艺,再以卡波姆为基质制备固体脂质纳米粒凝胶。通过其乳膏剂、固体脂质纳米粒凝胶、水混悬液凝胶剂3种外用制剂的透皮速率做对比,考察其体外经皮渗透性。采用二硝基甲苯（DNCB）作为外部抗原,对小鼠耳朵多次激发,建立小鼠慢性皮炎湿疹模型考察乳膏剂的药效。皮肤刺激性实验以及急性毒性实验等对所研制的西罗莫司乳膏进行了安全性考察。方法:（1）采用传统乳化法制备O/W型西罗莫司乳膏剂,用HPLC建立西罗莫司的分析方法,并进行了一系列的方法学验证。（2）乳化蒸发-低温固化法制备西罗莫司固体脂质纳米粒,葡聚糖凝胶微柱离心法测定西罗莫司固体脂质纳米粒的包封率。在筛选单因素基础上,以包封率和稳定性为指标,利用正交设计优化处方和制备工艺,并对固体脂质纳米粒粒径、Zeta电位及包封率进行评价,对其含量及稳定性进行考察。并以卡波姆为基质制备西罗莫司固体脂质纳米粒凝胶和西罗莫司水混悬液凝胶剂。（3）采用改良的垂直型Franz扩散池和小鼠皮肤进行体外经皮渗透实验,采用HPLC测定透皮接收液药物浓度并计算药物累积渗透量和皮内滞留量。（4）采用二硝基甲苯（DNCB）作为外部抗原致敏,对小鼠耳朵多次激发,建立小鼠慢性皮炎湿疹模型考察乳膏剂的药效。（5）从皮肤刺激性和急性毒性两方面对所研制的西罗莫司乳膏安全性进行了评价。结果:（1）制备的西罗莫司乳膏的含量符合要求,同时分析方法的专属性好、精密度及回收率高,能准确用于西罗莫司的含量测定。（2）正交设计确定了西罗莫司固体脂质纳米粒的最佳制备处方及工艺,即西罗莫司10mg,硬脂酸40mg,卵磷脂30mg,表面活性剂（泊洛沙姆188:Brij78=1:1）,制备温度65℃,转速1200r·min^-1,采用乳化蒸发-低温固化法制备,所得制剂在电镜下看外形圆整,平均粒径为（124.7±11.2）nm,Zeta电位为（-10.3±0.6）mV,平均包封率为（80.72±0.63）%。（3）西罗莫司外用制剂的单位面积累积渗透量比较结果为:固体脂质纳米粒凝胶剂>乳膏剂>水混悬液凝胶剂。固体脂质纳米粒凝胶剂稳态透皮速率与乳膏剂、水混悬液凝胶剂相比要快,固体脂质纳米粒凝胶剂和乳膏剂的透皮速率分别为水混悬液凝胶剂的4.19、2.92倍。48h时西罗莫司在皮肤中的滞留量排序为固体脂质纳米粒凝胶>乳膏剂>普通凝胶。（4）药效学实验表明,给药处理后与模型组相比,小鼠耳部水肿明显减轻,角质层变薄,表皮厚度恢复正常,炎性细胞浸润也相应减少。表明西罗莫司乳膏能够改善小鼠慢性皮炎湿疹模型耳部炎症的病理改变。（5）皮肤刺激性、急性毒性实验表明自制的西罗莫司乳膏剂无毒、无刺激,安全性高。结论:本研究建立的西罗莫司乳膏剂和固体脂质纳米粒凝胶剂检测方法简便,可行性高,制得的西罗莫司外用制剂制备工艺简便可行,质量稳定可控,经皮给药后,可显著提高药物的透皮速率,同时增加药物在皮肤中的滞留量。药效学研究表明该制剂具有良好的抗慢性皮炎湿疹模型的作用;皮肤刺激性及急性毒性实验结果表明西罗莫司乳膏剂无毒、无刺激,安全性良好。