花椒叶抗氧化活性成分的分离、结构鉴定及其构效关系

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花椒(Zanthoxylum bungeanum)幼嫩茎叶作为一种高级食品和调味品,是当今蔬菜市场中的纯天然食品。目前,国内外学者对花椒根、茎、果实和果皮的风味物质、麻味物质及其它功能成分都进行了大量的研究,而有关花椒叶的功能物质及应用的科学内涵尚不清楚,制约了花椒叶的开发及高效利用。为了进一步开发利用花椒叶资源,本研究选取陕西省凤县大红袍花椒叶作为研究对象,采用各种分离纯化技术,对花椒叶的抗氧化成分进行了靶标分离和结构鉴定,从中分离得到9个黄酮类化合物,并对分离得到的化合物进行了体外和细胞内抗氧化活性评价及其构效关系的探讨,明确了抗氧化活性基团。研究结果如下:1.对花椒叶乙醇提取物及其5个次级组分的酚性成分及抗氧化活性进行了比较与分析,发现乙酸乙酯组分(EAF)和丙酮组分(AF)的酚性成分含量最高,抗氧化活性最强。因此,EAF和AF可作为花椒叶抗氧化成分分离的目标组分。2.采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20以及RP-HPLC等多种色谱方法从EAF和AF中分离得到9个黄酮类化合物,采用各种光谱分析技术(UV、IR、Ms、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR)鉴定其化学结构为:芦丁、牡荆素、金丝桃苷、异鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、三叶豆苷、槲皮苷、阿福豆苷和槲皮素。所有化合物均为首次从花椒叶中分离获得。其中,牡荆素、异鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、三叶豆苷和阿福豆苷首次从花椒属植物中分离得到。3.对分离得到的9个化合物进行了细胞内和体外抗氧化活性评价。结果表明,槲皮素及其糖苷的抗氧化活性最强。构效关系结果显示,A环7-OH和B环4’-OH是主要的抗氧化官能团,此外,B环和/或A环具有邻二羟基结构也可以增强其抗氧化活性。4.对花椒叶22个不同分离组分的指纹图谱和抗氧化活性进行了谱效关系分析,发现绿原酸、表儿茶素、芦丁、金丝桃苷、三叶豆苷、槲皮苷、阿福豆苷和槲皮素是花椒叶的主要抗氧化物质,其中槲皮苷和金丝桃苷贡献最大。5.建立了RP-HPLC快速同步检测花椒叶8个抗氧化物质的方法,为花椒叶的开发利用、质量评价及优良种质资源的选择提供了理论依据。
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