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猪蓝耳病的病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属成员。该病以母猪流产、死胎和木乃伊胎以及各种年龄猪的呼吸道疾病为特征，可通过胎盘、排泄物、空气等多种途径传播。2006年该病以猪表现“无名高热”的形式在我国大流行，给我国养猪业造成了巨大的经济损失，因此，建立一种快速高效的诊断方法对PRRSV的检测及预防尤为重要。
本文从HP-PRRSV(JX0601)株细胞毒提取总RNA，根据GenBank上的参考序列设计了一对扩增HP-PRRSV的NSP2基因主要抗原区的特异性引物，在引物的上下游引物分别带有NcoⅠ、Sa1Ⅰ酶切位点。通过RT-PCR获得长约485bp的目的片段，将其克隆到pGEM-TEasy载体，获得重组质粒pGEM-dNSP2。
用相同的限制性内切酶酶切阳性质粒pGEM-dNSP2和表达载体pET-32a后构建重组表达载体pET-dNSP2，转化宿主菌BL21(DE3)，经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆，测序证明目的基因以正确的阅读框插入了表达载体。用IPTG诱导重组载体的表达，收集菌液进行SDS-PAGE电泳，原核表达产物大小约为38.3KDa。进一步优化IPTG诱导浓度、培养时间和温度等条件，最后确定以37℃培养至(0)D600达0.6左右，加入IPTG至终浓度为1mmol/L，再以37℃继续培养5h，这样的培养条件下表达量最大，经分析表达蛋白量约占菌体蛋白的40.3％。表达产物经Western blot分析，能被PRRSV阳性血清所识别。试验结果表明高致病性PRRSV(JX0601) NSP2蛋白主要抗原区在大肠杆菌中高效表达且表达产物具有抗原性。
目的蛋白经大量诱导表达，上清和沉淀分别进行SDS-PAGE，证明重组蛋白以可溶性形式存在于超生裂解液上清中，用镍柱亲和层析法从上清中纯化目的蛋白。以纯化后的目的蛋白作为抗原包被聚乙烯微量反应板，初步建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。试验表明:抗原的最适包被浓度为20μg/mL，血清最适稀释度为1∶160;最适封闭液为1％BSA，封闭时间为37℃1h，最佳血清及二抗反应条件及时间均为37℃1h; HRP-兔抗猪IgG的最适工作浓度为1∶5000;底物显色液的最佳反应时间为15min;统计学分析后确定阴阳性的临界值为0.35。通过特异性试验、重复性试验、符合性试验及对临床样品检测的结果显示，该方法特异、敏感、快速和操作简便。这为进一步开发PRRSV抗体检测试剂盒奠定了基础。