南高丛越橘品种“V3”(Vaccinium austral)四倍体诱导及鉴定

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越橘(Vaccinium L.),杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)多年生灌木性植物,是原产北美的多年生果树。越橘单叶互生,常为卵圆形,北方多数种落叶,部分南方地区种常绿。越橘果实颜色、大小因为品种不同而有差异;在自然条件下,越橘生长在含有丰富有机质的微酸性土壤中。南高丛越橘原产美国东南部亚热带,喜温暖湿润的气候条件,在我国黄河以南的华中、华南地区发展较多,其栽培品种较少。本试验的南高丛越橘品种“V3”二倍体材料引种重庆多年,生长迅速,抗性强,病虫害少,果实品质佳,鲜食口感好,但果实较小,产量受限。而多倍体植物一般生长健壮、果实巨大、抗逆性强,本研究试图通过秋水仙素处理南高丛越橘品种“V3”二倍体材料,从而得到多倍体。为培育大果型南高丛越橘新品种奠定基础。本试验以南高丛越橘品种“V3”组培无菌苗作为材料,选用化学药剂秋水仙素对越橘苗茎尖进行四倍体诱变,研究室外生长点滴液法和离体诱导法两种诱导方法中不同处理方式对南高丛越橘品种“V3”茎尖的诱导效果,从而确定不同方法中秋水仙素诱变的最佳处理浓度和时间。通过形态观察法和染色体计数对所获得的变异株进行倍性鉴定。获得的变异株均为嵌合体,对其进行分离可获得南高丛越橘品种“V3”的四倍体植株。对经过染色体鉴定后的四倍体植株的生物学特性、抗逆性、花青素含量与二倍体对照植株进行差异性比较,可以为今后培育果实巨大、抗逆性强的越橘新品种提供理论依据。主要研究结果如下:1.在室外生长点滴液法中,以秋水仙素处理南高丛越橘品种“V3”茎尖,研究结果表明:0.05%~0.20%的浓度范围内,越橘栽植苗茎尖对秋水仙素的敏感度较高,以0.20%秋水仙素浓度处理24h效果最好,存活率为83.33%,变异率为6.67%。2.离体诱导法(1)以增殖系数作为不同激素浓度增殖能力的指标,确定最适宜的ZT激素浓度,结果表明:在改良后的WPM培养基中添加浓度为0.20mg/L的ZT激素,增殖系数最大为8.0。(2)茎尖浸泡法诱变效果优于培养基添加法,结果表明:浸泡法中0.10%秋水仙素浓度处理24h效果最好,变异率为16.67%,培养基添加法中在秋水仙素浓度为0.30%的培养基中处理茎尖20d,茎尖的变异率最高,为6.67%。3.经过秋水仙素处理后植株,通过外部形态观察发现:变异株茎杆变粗、颜色加深,新长出的茎尖周围叶片数增加、茎尖颜色发红、表皮毛增多、叶片变厚、叶色加深、保卫细胞明显增大、单位面积内气孔数目减少、栅栏组织和海绵组织厚度增加。4.根据越橘茎杆的横切片观察发现:变异株茎段表皮细胞、角质膜、皮层厚角组织增厚;初生韧皮部与二倍体对照株相比,显著增加。变异株的初生木质部和髓射线数量增多,髓的面积明显增加。变异株初生韧皮部厚度和髓直径是二倍体植株的328%、218%。5.染色体数目计数结果表明:二倍体对照株染色体数目为24条,2n=2x=24,变异株为嵌合体植株,染色体数目既有24条也有48条,四倍体植株染色体数目为48条,2n=2x=48。6.南高丛越橘品种“V3”四倍体与二倍体植株的植株叶绿素、MDA、SOD、可溶性糖、脯氨酸生理指标比较结果显示:四倍体植株较二倍体植株生理指标含量方面有较显著变化。四倍体叶绿素含量、SOD、可溶性糖、脯氨酸均高于二倍体,丙二醛低于二倍体。四倍体叶片含水量略高于二倍体。7.通过溶剂浸提法和酶提法对南高丛越橘品种“V3”四倍体与二倍体植株的叶片、茎杆进行花青素提取。结果表明:溶剂浸提法优于酶提法。在溶剂浸提法中,四倍体植株的茎杆和叶片中的花青素含量都明显高于二倍体植株,且叶片花青素的含量高于茎杆中花青素含量。
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