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背景:骨肉瘤是儿童、青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤,占原发性恶性骨肿瘤的30%。儿童(0-14岁)和青少年(15-19岁)的5年生存率分别为69.6%和65.7%,而转移性患者仅为20-30%。在过去的20-30年内,骨肉瘤的治疗一直没有突破。目前骨肉瘤的治疗主要以化疗和手术为主。化疗在骨肉瘤的治疗中占用重要的地位。然后,即使规范地使用新辅助化疗,骨肉瘤的预后仍然不令人满意。其中,化疗耐药是其预后不良的主要原因。虽然人们针对化疗耐药进行了大量的研究,但化疗耐药的机制目前仍然未能明确。1973年,Rosenberg第一次报道了顺铂的抗癌功能。目前,在骨肉瘤化疗的一线方案中,顺铂是必不可少的重要成员,其发挥作用的机制较为复杂,目前研究得最清楚的模式是链间和链内DNA交联,通过形成DNA-铂加合物激活凋亡信号转导通路,导致细胞死亡。还有实验证据表明,其他机制,如活性氧的产生和炎症通路的激活,也可能有助于诱导细胞凋亡。Ambra1,也称为自噬/Beclin-1调节剂1,是一种本质上高度无序的脊椎动物保守的衔接蛋白,是自噬信号网络的一部分。Ambra1与胚胎发育、神经系统疾病以及肿瘤有关。已有证据表明Ambra1导致人结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、神经母细胞瘤以及乳腺癌等对化疗药物耐药。Ambra1在骨肉瘤耐药方面的作用还不清楚。在本次研究中,我们发现Ambra1可以降低顺铂干预的骨肉瘤细胞U20S的敏感性。目的:1、探讨顺铂干预骨肉瘤U20S细胞后对Ambra1表达的影响;2、探讨Ambra1的表达水平对顺铂干预骨肉瘤细胞U20S敏感性的影响。方法:1、收集3例骨肉瘤病人的癌组织和癌旁组织,通过基因芯片检测Ambra1 mRNA的表达水平;2、使用RT-qPCR检测人成骨细胞hFOB1.19和3个人骨肉瘤细胞株(U20S、MG63、Saos2)中 Ambra1 mRNA 的表达水平;3、不同浓度的顺铂干预骨肉瘤U20S细胞,应用流式细胞术检测不同浓度下骨肉瘤U20S细胞的凋亡率,应用RT-qPCR检测不同浓度下骨肉瘤U20S细胞中Ambra1 mRNA的表达;4、通过慢病毒转染,构建Ambra1过表达和干扰的U20S细胞株,并采用RT-qPCR检测Ambra1 mRNA的表达以确认细胞模型构建成功;5、使用同一浓度的顺铂干预未转染和转染的U20S细胞,检测caspase 3活性及LC3B的表达。结果:1、Ambra1在3例骨肉瘤患者的癌组织及癌旁组织中均有表达,且在癌组织中的表达均低于癌旁组织;2、在人成骨细胞hFOB1.19和3个人骨肉瘤细胞株(U20S、MG63、Saos2)中均检测存在Ambra1表达。Ambra1在Saos2中的表达较hFOB1.19偏高,在MG63中的表达和hFOB1.19基本一致,在U20S中的表达较hFOB 1.19 偏低;3、随着顺铂浓度升高,凋亡率逐渐上升,Ambra1的表达也逐渐上升,但当顺铂浓度上升到·定阈值后,Ambra1则骤降;4、同一浓度顺铂干预时,Ambra1过表达组的caspase 3活性降低,LC3B表达增多;与之相反的是,Ambra1干扰组的caspase 3活性升高,LC3B表达降低。结论:顺铂干预骨肉瘤细胞U20S会导致Ambra1表达升高,Ambra1高表达会降低人骨肉瘤细胞株U20S对顺铂的敏感性,这和Ambra1介导的自噬相关。