竹叶黄酮的纯化与增溶工艺及抗氧化性能的研究

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黄酮类化合物是一类具有多种生物功效的次级代谢产物,广泛存在于中药材,水果,茶等天然作物中。竹叶中含有极为丰富的黄酮类化合物,大量研究表明竹叶黄酮具有显著的抗氧化和清除自由基、抗炎、抗菌、增强免疫力、调节血脂和降低胆固醇、阻断亚硝化等生物功效。但竹叶黄酮溶解性不够理想,脂溶性尤其差,大大地限制了其应用范围。本文建立竹叶黄酮的纯化方法,以得到安全、纯度高的黄酮类化合物,并且制备了油溶性和水溶性黄酮包埋物,同时考察了其抗氧化性能。首先,采用溶剂萃取法对竹叶黄酮粉末进行纯化,比较了萃取溶剂乙醇、乙酸乙酯、混合溶剂(乙醇和乙酸乙酯)以及正丁醇对总黄酮纯度和得率的影响,优化提取工艺条件,为制备油溶性包埋产品提供原料。其最佳纯化工艺条件为:黄酮粉末2.0 g,萃取溶剂乙酸乙酯和乙醇的比例为4:1,液料比30:1,萃取温度60℃,萃取时间20 min,萃取3次。得到的黄酮纯度为51.3%,回收率为81.7%。其次,用溶剂-熔融法制备油溶性竹叶黄酮包埋物,建立了黄酮在大豆油中澄清度的检测方法。以黄酮油溶液的透光率和溶解情况为评价指标,筛选出了油溶性竹叶黄酮的最优条件:竹叶黄酮1.0 g,用40 mL 50%乙醇超声溶解,包埋载体材料单硬脂酸甘油酯6.0 g,乳化剂的HLB值为5,乳化剂的质量分数(m乳化剂/m黄酮溶液)为0.4%,乳化温度60℃,乳化时间20 min。制备得到的黄酮包埋产品在油中的浓度为0.02%时,以清油为空白对照在600nm处测得的透光率为86.3%,此条件下黄酮油溶液最澄清,油溶性相对最好。然后用碘量法比较了不同浓度的黄酮油溶液和黄酮原料在大豆油中的抗氧化效果。结果显示在(60±2)℃的恒温箱中加速氧化8天后,包埋产品的过氧化值低于黄酮原料,表明油溶性包埋物可以改善黄酮油溶性差的问题,还能提高抗氧化效果。黄酮在油中的浓度为0.02%时,测得的过氧化值最小,抗氧化效果最好;当黄酮在油中的浓度为0.03%时,少部分黄酮不能完全溶解,影响其抗氧化效果和澄清度。最后,用喷雾干燥法制备水溶性竹叶黄酮包合物,同时用邻二氮菲Fe2+氧化法测定了在水溶液中的抗氧化稳定性。以黄酮的包合率作为评定指标,考察了各种影响因素,从而确立了包合物的最佳制备工艺条件:黄酮粉末(35%)1.0 g溶于20 mL 50%乙醇中,壁材β-环糊精6.0 g,用蒸馏水配成浓度为4%的水溶液,吐温80用量为黄酮质量的0.4%,在60℃恒温水浴中搅拌50 min,喷雾干燥进风温度为150℃。制备的黄酮包合物平均粒径为(152.5±10.0)nm,粒径分布(PDI)值为0.37,包合率为87.4%。从清除活性氧自由基能力的比较中可得知,其抗自由基活性与VC相当,并显著强于VE,可达到50%,竹叶黄酮制成包合物后显著提高了抗氧化稳定性和掩盖了竹叶的气味。
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