犬子宫蓄脓大肠杆菌毒力基因及其LD50、耐药性和致病性研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dabei008
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在小动物临床上,犬子宫蓄脓是一种常见的生殖系统疾病,严重影响犬的生殖能力甚至威胁生命。本研究的目的在于:(1)分离鉴定犬子宫蓄脓细菌种类,分析大肠杆菌分离株的同源性;(2)检测和分析犬子宫蓄脓大肠杆菌的毒力基因及其毒力和耐药性;(3)研究不同毒力的大肠杆菌对复制子宫内膜囊性增生/子宫蓄脓(CEH/P)动物模型及其毒力的影响。为此,本试验采取:(1)对患病犬子宫内容中的细菌进行常规分离培养、生化鉴定,并保存菌种;运用多位点序列分型(MLST)方法分别对大肠杆菌分离株的7个保守基因进行测序,并在数据库中确定大肠杆菌的分型,进行亲缘性比较,绘制同源性进化图;(2)针对大肠杆菌分离株,采用PCR技术检测其毒力基因的分布,选用小鼠半数致死量方法检测其毒力,并对分离株进行20种抗菌药物敏感试验;(3)选取临床表现健康、未有配种生育经历的9只雌性中华田园犬进行CEH/P动物模型复制。试验分3组,每组3只犬。第1、2组为试验组,第3组为对照组。先对试验组和对照组犬进行卵巢摘除术。与此同时,试验组犬左侧子宫角内埋置缝线,术后3-4周,试验组犬注射雌激素和孕酮,在其进入发情后期12d后,将毒力较强的大肠杆菌灌注到第1组试验犬子宫中,将毒力较弱的大肠杆菌灌注到第2组试验犬子宫中;在CEH/P动物模型复制成功后,对试验犬子宫内容物中细菌进行分离培养,采用大肠杆菌MLST方法检验其是否为灌注的大肠杆菌,并对大肠杆菌的毒力进行检测,与灌注前的毒力进行对比。结果表明:(1)在26例犬子宫内容物中有23例分离到病原菌,3例无细菌生长。生化检测显示,其中分离到大肠杆菌11例(47.8%)、金黄色葡萄球菌5例(21.7%)、克雷伯菌3例(13.0%)、,链球菌3例(13.0%)及铜绿假单胞菌1例(4.5%);MLST分型结果显示,子宫蓄脓中大肠杆菌与肠道内粪源性大肠杆菌的亲缘性进化关系并不密切,但与尿道致病性大肠杆菌的某些菌株进化关系较亲近。(2)发现不同毒力基因分布的大肠杆菌之间存在毒力差异,含有毒力基因较多的分离株毒力相对较强;分离株对青霉素、苯唑西林、红霉素等有较高的耐药性,而对其他药物,尤其是氨基糖苷类抗生素、头孢类抗生素等则有较高的敏感性。(3)两组试验组分别灌注强、弱毒大肠杆菌犬均成功地复制CEH/P模型,说明大肠杆菌的毒力强弱对感染犬致CEH/P的影响不大,其并非致病的决定性因素;复制后CEH/P模型大肠杆菌毒力大部分增强,与灌注前比较差异显著(P<0.05),但也有不显著(P>0.05)。结论:(1)大肠杆菌是犬子宫蓄脓病原菌的优势菌种,同肠道大肠杆菌相比,该菌与UPEC的同源性较近。(2)大肠杆菌中含有毒力基因的数量可能与其毒力呈正比;可采用氨基糖苷类抗生素和头孢类抗生素对大肠杆菌引起的犬子宫蓄脓进行临床治疗。(3)无论毒力强弱,使用大肠杆菌均可成功诱导CEH/P动物模型,且诱导后大部分细菌毒力略有增强。
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