紫金牛属MyrsinaceaeArdisia植物大多是我国的传统中草药及民族药物，自宋《图经本草》记载该属植物药用以来至今已有九百多年的历史，其使用种类多、使用区域广，对跌打、风湿、痨咳及各种炎症有良效。近年来研究发现紫金牛属植物具有较强的杀菌、抗HIV、抑制肿瘤等活性，因而备受国内外学者关注。莲座紫金牛Ardisiaprimulaefolia和虎舌红Ardisiamamillata作为紫金牛属的两种植物，多处于自然野生状态，特别是莲座紫金牛因分布范围窄、生长缓慢、不易繁殖、成分不明确而未得到充分应用；此外，两种植物外形相似，生境相同，易发生混淆，它们的生药学特征也未进行过深入的研究。因此，本课题拟对主产地为广西的莲座紫金牛和虎舌红的资源状况、品种鉴别、药材品质、化学成分以及莲座紫金牛的抗肿瘤活性进行系统研究，以期寻找新的药理活性成分，为更好地开发利用该属植物资源提供实验依据。研究目的：比较主产于我国广西省的紫金牛属植物莲座紫金牛和虎舌红的资源状况、生药学特征、药材质量、化学成分差异，并对莲座紫金牛的不同萃取部位进行抗肿瘤活性研究。研究方法：1、在查阅相关文献资料和核对标本的基础上，采用走访调查和实地调查相结合的方法对分布于广西地区的莲座紫金牛和虎舌红植物进行资源调查。对采集到两种植物样本的外观性状和显微特征进行观察比较；采用《中国药典》2010年版中药材质量标准项下的检测方法，对莲座紫金牛和虎舌红的水分、灰分、醇浸出物及水浸出物含量进行测定；采用化学成分系统预试法初步分析两种植物的化学成分，并用紫外分光光度法测定两种药材的总皂苷含量。2、采用MMT法测定莲座紫金牛的不同萃取部位对宫颈癌HeLa细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制作用；在显微镜下观察细胞的形态变化；采用流式细胞术检测其对宫颈癌细胞HeLa和肺癌细胞A549的凋亡率和细胞周期变化的影响。采用皮下接种HeLa细胞的方法建立裸鼠移植瘤宫颈癌模型，观察莲座紫金牛不同萃取部位对裸鼠宫颈癌HeLa细胞移植瘤的作用。研究结果：1、经实地调查和走访调查，发现广西省莲座紫金牛和虎舌红的集中分布区域在南宁市大明山自然保护区和百色市古龙山自然保护区。莲座紫金牛和虎舌红主要生长在海拔高度为800-1200m的山坡密林、荫湿的地方；植被类型为山地、丘陵，主要伴生植物为林木，灌木、藤木、草本等，同属植物有光萼紫金牛、百两金、红凉伞等；资源类型主要为野生，莲座紫金牛无人工栽培，虎舌红有少量人工栽培。在实地调查过程中发现莲座紫金牛和虎舌红生长环境基本相同、外形相似，容易混淆。2、生药学特征比较发现，莲座紫金牛和虎舌红的植株形态虽非常相近，但虎舌红有匍匐木质根状茎，叶非莲座状，叶面的毛基部隆起如小瘤，可进行区分。两种植物显微特征研究结果显示，根横切面：莲座紫金牛的皮层较虎舌红的皮层宽，内有明显的分泌腔，而虎舌红的形成层较明显，髓部较发达，内有分泌腔分布。茎横切面：莲座紫金牛茎的皮层有分泌腔分布，二者的形成层均不明显；髓部均较宽，有分泌腔分布。叶横切面：两者均相似，无明显的差异。3、采集的莲座紫金牛和虎舌红样本经测定：水分含量在6.01%-8.68%之间，其中根、茎、叶三个部位，根的水分含量最高，叶的水分含量最低；虎舌红根、茎水分含量均较高，莲座紫金牛叶中是水分含量较高；总灰分的含量在2.45%-10.67%之间，莲座紫金牛根、茎、总灰分含量均高于虎舌红，虎舌红叶的灰分含量高于莲座紫金牛。两种植物的醇浸出物含量在6.12%-21.40%之间，水浸出物含量在8.53%-14.44%之间，虎舌红根、茎、叶醇浸出物和水浸出物的含量均高于莲座紫金牛。4、化学成分系统预试结果显示：莲座紫金牛和虎舌红中均含有糖、多糖、苷类，氨基酸、多肽、蛋白质类、有机酸类、皂苷类、鞣质、酚类、醌类、黄酮类成分；二者含有的不同成分是香豆素类、生物碱类、强心苷类、油脂类；总皂苷含量测定表明，莲座紫金牛总皂苷含量略高于虎舌红。5、莲座紫金牛干燥全草经提取萃取，得到石油醚部分、水层部分（aqueousextract，AE）、正丁醇部分（n-butanolextract，NBE）三个组分；通过体外抗肿瘤筛选实验（MTT法），结果表明AE和NBE对宫颈癌细胞HeLa和肺癌细胞A549均具有显著的抑制肿瘤增殖作用，对肺癌细胞A549作用呈剂量-效应关系，而对宫颈癌细胞HeLa则呈时间-剂量-效应关系；在显微镜下可观测到NBE和AE作用48h后的细胞与对照组相比，细胞形态发生明显变化，细胞数量也明显减少，细胞体积缩小，呈不规则或团块；通过AE和NBE作用于宫颈癌细胞HeLa和肺癌细胞A549的流式细胞术结果可以看出，AE和NBE均可诱导HeLa和A549细胞凋亡，NBE对两种细胞的作用均较AE强；细胞周期结果显示，细胞周期均阻止在G0/G1期。6、莲座紫金牛正丁醇萃取部分（n-butanolextract，NBE）对裸鼠移植瘤模型具有较明显的抗肿瘤作用，三个剂量组荷瘤鼠的体重与对照组相比均无显著性差异；阳性对照组的体重略低于对照组和治疗组。高剂量组和阳性对照组对荷瘤小鼠肿瘤的生长有明显抑制作用；中、低剂量组对肿瘤生长的抑制作用较弱，NBE对裸鼠宫颈癌移植瘤模型的抑制率在一定范围内存在剂量依赖性。研究结论：1、中国为主产地的紫金牛属植物莲座紫金牛和虎舌红分布范围窄，分布数量较少，生态环境变化使成年植株锐减，宜选取优良的植株进行人工栽培繁殖以优化这两种植物的种质。2、莲座紫金牛和虎舌红的植株外观形态非常相近，莲座紫金牛和虎舌红显微结构有一定的差异，通过比较两种植物根、茎横切面显微特征，即皮层、分泌腔、形成层等不同之处可将两种生药区别。3、水分、灰分、醇浸出物及水浸出物含量测定表明，莲座紫金牛与虎舌红具有显著区别，在用药与研究中应加以区分，研究结果为两种植物质量标准的建立提供了依据。4、紫金牛属两种植物中含有多种共同成分，但也有部分不同成分，说明两种植物具有一定差别，在用药中不能作为同一种药物使用同时，莲座紫金牛总皂苷含量略高于虎舌红。5、莲座紫金牛不同萃取部位对宫颈癌细胞HeLa和肺癌细胞A549均具有显著的肿瘤细胞抗增殖作用，在显微镜下可观测到莲座紫金牛不同萃取部位对作用于宫颈癌细胞HeLa和肺癌细胞A549，细胞形态发生明显变化；均可诱导HeLa和A549细胞凋亡，细胞周期均阻止在G0/G1期。经莲座紫金牛正丁醇萃取部分（NBE）治疗后，对荷瘤小鼠的一般特征有所改善，NBE对裸鼠宫颈癌移植瘤模型的抑制作用表现为肿瘤体积相对缩小。