【摘 要】
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目的:探究TGFβ1-IL11对卵巢纤维化的调控作用及潜在的分子机制。方法:（1）利用不同周龄（3W,6W,12W,24W,36W,48W）的小鼠卵巢,通过免疫组化、实时定量聚合酶链式反应检测TGFβ1、IL-11在卵巢组织中的表达及定位,明确TGFβ1-IL11参与调控年龄介导的卵巢纤维化;（2）提取小鼠卵巢间质细胞进行体外培养,使用重组鼠源性TGFβ1细胞因子进行干预,利用ELISA、real
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目的:探究TGFβ1-IL11对卵巢纤维化的调控作用及潜在的分子机制。方法:（1）利用不同周龄（3W,6W,12W,24W,36W,48W）的小鼠卵巢,通过免疫组化、实时定量聚合酶链式反应检测TGFβ1、IL-11在卵巢组织中的表达及定位,明确TGFβ1-IL11参与调控年龄介导的卵巢纤维化;（2）提取小鼠卵巢间质细胞进行体外培养,使用重组鼠源性TGFβ1细胞因子进行干预,利用ELISA、realtime PCR、western blot检测IL-11及纤维化相关指标的表达水平,明确TGFβ1对卵巢功能和卵巢纤维化的调控关系;（3）提取小鼠卵巢间质细胞、人卵巢成纤维细胞进行体外培养,分别使用重组鼠源性、人源性IL-11干预,利用细胞免疫荧光、realtime PCR、western blot检测纤维化标志物α-SMA、炎症因子（TNF-α,IL-1α,IL-1β,IL-6,IL-11）、纤维化相关指标（α-SMA,CTGF,TGFβ1,Col1A1,Col3A1,FN等）、下游通路（ERK1/2,p-ERK1/2,Smad2/3,p-Smad2/3）的表达水平,明确IL-11的促纤维化作用;（4）选择8周雌性C57BL/6J小鼠,随机分为2组,分别为对照组（颈部皮下注射生理盐水,100μg/kg/d,连续28天）和实验组（颈部皮下注射生理盐水配制的重组鼠源性IL-11,100μg/kg/d,连续28天）,每天监测体重变化,自造模第21天开始监测动情周期2周;造模结束于动情间期处死小鼠,使用ELISA检测血清AMH、E2、FSH性激素和IL-11水平,同时取各组小鼠卵巢,统计卵巢质量和卵巢指数,并将卵巢固定包埋切片,进行H＆E染色用于卵泡计数;使用天狼猩红染色、免疫组化、实时定量聚合酶链式反应、免疫印迹实验等方法检测纤维化程度及其标志物α-SMA和IL-11的表达,探讨IL-11作为促纤维化的关键因子对卵巢功能及卵巢纤维化的影响。结果:（1）TGFβ1在小鼠卵巢中的表达呈增龄性增长,36周时达高峰,主要表达于小鼠卵巢间质部位。TGFβ1干预小鼠卵巢间质细胞后,纤维化相关指标（α-SMA,Col1A1,CTGF,TGFβ1）的m RNA和蛋白表达水平升高;TGFβ1干预后下游靶基因IL-11显著上调,表明TGFβ1可能介导IL-11调控卵巢纤维化;（2）IL-11在小鼠卵巢组织中的表达也呈增龄性增长,48周时达高峰,且主要表达于卵巢间质和黄体。IL-11干预小鼠卵巢间质细胞及人卵巢成纤维细胞后,细胞α-SMA免疫荧光染色（+）,炎症因子（TNF-α,IL-1α,IL-1β,IL-6,IL-11）、纤维化相关指标（α-SMA,CTGF,TGFβ1,Col1A1,Col3A1,FN）的m RNA和蛋白水平升高,通路蛋白磷酸化产物p-ERK1/2及p-Smad2/3的表达水平上调,表明IL-11可使成纤维细胞活化,炎症因子释放增加,并激活下游ERK和Smad通路发挥促纤维化作用;（3）IL-11体内干预小鼠后,rm IL-11干预组的体重、全身重要脏器结构功能等一般情况与control组相比无明显改变;与control组相比,rm IL-11组小鼠动情周期不规律比例升高,血清AMH（1.26±0.11 vs.0.93±0.14 ng/ml,P＜0.05）、E2水平降低（127.06±24.87 vs.90.11±16.34 pg/ml,P＜0.05）,FSH水平升高（7.00±2.79 vs.14.72±4.61 m IU/ml,P＜0.05）,表明IL-11干预可导致卵巢储备和内分泌功能下降;（4）rm IL-11组小鼠卵巢纤维化标志物α-SMA和IL-11的m RNA和蛋白表达水平升高,胶原纤维阳性比例升高,卵巢间质纤维化程度加重,证实IL-11参与调控卵巢纤维化从而影响卵巢功能。结论:前期本课题组的研究已经证实卵巢纤维化与卵巢功能负相关,TGFβ1参与调控卵巢纤维化影响卵巢功能。本研究发现TGFβ1介导下游靶基因IL-11显著上调,IL-11可使成纤维细胞活化,炎症因子释放增加,纤维化相关指标表达增强,介导下游ERK和Smad信号通路激活,从而促使卵巢纤维化的发生。本研究初步揭示了TGFβ1-IL11介导卵巢纤维化的分子机制,为防治纤维化相关卵巢功能衰退提供了新思路。
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