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本文研究目的:为明确机体在严重创伤情况下小肠粘膜上皮细胞刷状缘二肽转运载体的功能变化规律,制作大鼠严重烫伤的在体模型,并利用此模型研究创伤后大鼠小肠粘膜上皮细胞刷状缘二肽转运载体的转运和摄取功能的变化,进一步明确严重烫伤大鼠小肠上皮细胞损伤后二肽转运载体功能。
研究方法:SD大鼠正常饲养1W后,背部剃毛。盐酸氯氨酮腹腔麻醉后制成30%TBSAⅢ度烫伤模型,经病理检测和大鼠小肠粘膜厚度、绒毛高度、隐窝深度及绒毛表面积等指标确定模型的标准化。制作大鼠小肠的外翻小肠囊,将取下的肠段在Krebs液中轻轻清洗,挤出内容物,向下翻转小肠段。肠段外翻后,先结扎肠囊的一端,然后用取样器取0.2ml的Krebs液,沿浆膜壁慢慢注入到浆膜腔中,结扎另一端,外翻肠囊即制作完成。新制备的外翻肠囊用Krebs液清洗后放进盛有Krebs液的培养皿中。将制作完成的外翻肠囊浸入含二肽溶液(3H-Gly-Sar,10μCi)的三角烧瓶中,注入含95%O2、5%CO2的混合气体后,盖紧瓶盖,置于37℃恒温振荡培养箱中孵育15min,振荡速率为100r/min。孵育完成后取出肠囊,迅速用冰盐水冲洗4遍,置冰板上剪开肠囊一端,倒出0.2ml的浆膜液。浆膜腔内用0.4ml的Krebs液轻轻冲洗2遍,得转运液,共1.0ml;取肠囊中段肠片约0.5×0.5cm,称重,经裂解液处理后即得摄取液。用此外翻小肠囊研究烫伤大鼠小肠上皮细胞刷状缘二肽转运载体对二肽的摄取和转运功能。RT-PCR检测不同情况下二肽转运载体的表达水平。
研究结果:烫伤后大鼠光镜下小肠肠壁较对照组明显变薄,绒毛变短,细胞肿胀脱落,粘膜腺体稀疏排列。图像分析见创伤组大鼠小肠粘膜厚度、绒毛高度、隐窝深度及绒毛表面积均显著低于对照组(P≤0.01)。烫伤后大鼠小肠粘膜上皮细胞刷状缘二肽转运载体的摄取功能和转运功能均明显下降(P≤0.05);烫伤后大鼠小肠粘膜上皮细胞刷状缘二肽转运载体转(PepT1)mRNA明显下降。
研究结论:机体在严重创伤(大面积烫伤)时肠上皮细胞二肽转运载体(PepT1)的摄取和转运功能有明显的变化。研究显示,烫伤大鼠肠系膜血管搏动明显减弱,血管变细,血液流速减慢,肠管色泽明显变淡,提示烫伤后胃肠道等内脏器官的血液供应减少;由于肠道粘膜上皮细胞绒毛的高度、隐窝深度及粘膜的厚度均较正常明显下降,这从解剖结构上提示胃肠道的生物学功能将受到严重的影响。对肠上皮细胞二肽转运载体(PepT1)的摄取和转运功能的研究证实,严重创伤时二肽转运载体的转运和摄取功能均较正常时明显下降,其功能下降的本质变化是PepT1mRNA表达减少,导致PepT1载体蛋白的合成减少。
本研究的临床意义在于,在机体创伤时,其胃肠道功能全面下降,包括二肽等蛋白质产物的吸收也明显下降,此时不宜进高蛋白饮食,必须在机体各系统包括肠道的功能得到全面调整和改善后才有可能实施高营养治疗。