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目的探索药物孟鲁司特钠对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145和PC3增殖及凋亡的影响及其作用机制,为进一步对雄激素非依赖性前列腺癌的临床治疗提供新的研究方向和初步的理论依据。方法将雄激素非依赖前列腺癌DU145和PC3细胞作为本课题研究的目的细胞,实验用药为药物孟鲁司特钠,设置药物组和空白对照组,分别以不同药物浓度(3μg/ml,1.5μg/ml)以及不同时间点(Oh,24h,48h)的药物作用,空白对照组不加药物处理,然后将空白组及药物作用组分别用以下实验方法探究孟鲁司特钠对雄激素非依赖前列腺癌细胞DU145和PC3细胞增殖及凋亡的影响:1.CCK8法,检测药物孟鲁司特钠作用DU145和PC3细胞后细胞活性以及生长抑制作用(增殖-毒性研究);2.普通光学显微镜法,观察药物孟鲁司特钠作用DU145和PC3细胞后细胞的形态学变化;3.扫描镜法(SEM),进一步证实药物孟鲁司特钠作用DU145和PC3细胞后出现的细胞表面超微结构的变化;4.透射电镜法(TEM),进一步证实药物孟鲁司特钠作用DU145和PC3细胞后出现的细胞内部超微结构的变化;5.划痕实验(Cell wound scratch assay)验证药物孟鲁司特钠作用DU145和PC3细胞后对细胞迁移能力的影响;6.实时荧光定量-聚合酶链反应(Real time PCR),检测凋亡通路相关基因bcl2、bax的mRNA表达,内参基因选择GAPDH;结果:1.CCK8法实验结果表明孟鲁司特钠对雄激素非依赖前列腺癌细胞DU145和PC3细胞均有明显抑制生长作用,有增殖抑制和毒性影响,且通过细胞的生长曲线可知,药物孟鲁司特钠对DU145和PC3细胞的ICso均约为3μg/ml。2.在普通倒置光学显微镜下观察,明显可见雄激素非依赖性前列腺癌DU145和PC3两种细胞的空白对照组与药物组在细胞形态上均有明显差别,两种细胞的空白对照组正常生长,而药物组均出现明显细胞凋亡现象。3.扫描电镜结果显示在孟鲁司特钠作用雄激素非依赖性前列腺癌DU145和PC3细胞后,两种细胞表面超微的形态结构均出现了明显的的改变。4.透射电镜结果显示在孟鲁司特钠作用雄激素非依赖性前列腺癌DU145和PC3细胞后,两种细胞内部超微的形态结构均出现了明显的细胞凋亡现象。5.划痕实验证实孟鲁司特钠对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145和PC3的生长迁移能力有抑制作用:两种细胞的空白对照组24h后有明显迁移,48h后迁移愈合完全。两种细胞的药物组24h后没有明显迁移,且有细胞凋亡,48h后大量细胞凋亡,细胞迁移明显受抑制。6.实时荧光定量PCR结果显示,在孟鲁司特钠作用雄激素非依赖性前列腺癌DU145和PC3细胞后,两种细胞内基因bcl2、bax的mRNA的表达水平在不同的时间点和不同的药物浓度中发生变化,并且在DU145和PC3细胞中的有差异,在孟鲁斯特钠作用PC3细胞后,bc12和bax的mRNA的表达水平均为上调;但是药物作用DU145后,bc12的mRNA表达下调,bax的mRNA表达在药物作用24h后为表达上调,48h后为表达下调。结论:本课题进一步验证药物孟鲁司特钠对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145、PC3细胞有增殖抑制作用和影响细胞凋亡,可以为我们的后续的凋亡机制研究中提供前期理论基础和实践经验。