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目的:在前期工作的检测上,进一步探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞周期的阻滞作用,并研究组蛋白乙酰化状态及其调控p21WAF1蛋白表达改变的情况。
方法:MTT实验、细胞计数法观察不同浓度和作用时间DADS 对CNE2细胞的生长抑制作用;HE染色观察不同浓度和作用时间DADS对体外培养的CNE2细胞形态的影响;流式细胞术分析不同浓度和作用时间DADS对CNE2细胞的周期分布;免疫印迹分析不同浓度DADS诱导CNE2细胞组蛋白H3和H4乙酰化及周期相关蛋白P21WAF1表达变化。
结果:MTT比色法检测显示,DADS能明显抑制CNE2细胞增殖,呈浓度和时间依赖性,90μmol/L,140μmol/L,240μmol/L和400μmol/L DADS处理48h后,对CNE2细胞增殖的抑制率分别为3.33%、12.90%、28.38%和56.90%,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05)。细胞计数结果表明,常规培养的CNE2细胞群体倍增时间为24.51h,当DADS的浓度由90μmol/L增加到400μmol/L时,其细胞群体倍增时间由27.68h延长到93.10h,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。细胞形态学观察显示:90μmol/L,140μmol/L,240μmol/L和400μmol/L DADS处理细胞48后,与对照组细胞相比,异型性明显减少,核浆比例明显减小。流式细胞仪分析结果提示:DADS呈浓度依赖性将CNE2细胞阻滞在G0/G1期。Western blot分析,不同浓度的DADS处理CNE2细胞48h后,组蛋白H3乙酰化的表达均较对照组有增加,伴有药物浓度依赖性,90、140、240和400μmol/L 处理分别比NS对照组增加20%、32%、42%和30%,差异有显著性(P<0.05);与SB对照组比较时,除240μmol/L DADS处理组外,其余组均有差异显著(P<0.05)。同期实验发现,组蛋白H4乙酰化程度较对照组差异无显著性;p21WAF1蛋白表达量随着DADS浓度升高而上升。
结论:
1. DADS对CNE2细胞有抑制增殖作用,呈剂量依赖效应。
2. DADS对CNE2细胞的抑制增殖的机制,与组蛋白H3乙酰化水平提高, P21WAF表达上调,将细胞阻滞在G0/G1期有关。
3. DADS可能是一种潜在的组蛋白去乙酰化酶抑制剂。